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id | Description |
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title | Description |
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| Microscope inversé Nikon Ti2-E
Pavillon Roger Gaudry, Local R-619 Instrument octroyé au Dre Paradis-Bleau par le la Fondation canadienne pour l'Innovation (FCI)
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 1 - Applications
- Lumière transmise
- Contraste de phase
- Lumière polarisée
- Fluorescence
- Imagerie en temps réel
- Imagerie longue durée
Sources lumineuses
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title | Caractéristiques complètes du Lumencor Spectra X |
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Source lumineuse | ID du Filtre | Type de filtre | Longueurs d'onde d'excitation | Fluorophores compatibles | Puissance nominale (mW) |
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Violet | 395/25 | Bandpass | [382-407] | DAPI, Hoechst | 295 | Bleu | 440/20 | Bandpass | [430-450] | CFP | 256 | Cyan | | Bandpass | [458-482] | FITC, GFP | 196 | Bleu/Vert | 510/25 | Bandpass | [497-522] | YFP | 62 | Vert/Jaune | 550/25 | Bandpass | [542-557] | TRITC, Cy3 | 260 | Vert/Jaune | 575/225 | Bandpass | [562-587] | mCherry | 310 | Rouge | 640/30 | Bandpass | [625-655] | Cy5 | 231 |
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Objectifs - 20x/0.5 Air Ph1 WD 2.1
- 60x/1.4 Oil DIC WD 0.13
- 100x/1.45 Oil Ph3 WD 0.13
- 100x/1.45 Oil DIC WD 0.13
- 4x/0.2 Air WD 20
20x/0.75 Air DIC WD 1.0
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title | Caractéristiques complètes des objectifs |
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Position | Nom | Marque | Nom complet | Identifiant | Grossissement | Ouverture numérique | Immersion | Type | Distance de travail (mm) | Transmittance (% [nm]) | Technique | Épaisseur du couvre-objet (mm) |
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1 | 20x/0.5 Air Ph1 | Nikon | 20x/0.5 Air Plan Fluor Ph1 M25x0.75 | MRH10201 | 20x | 0.5 | Air | Plan Fluor | 2.1 | >80% [400-750] | BF, Pol, PhC, Fluo | 0.17 | 2 | 60x/1.4 Oil DIC | Nikon | 60x/1.4 Oil Plan Apo Lambda DIC N2 M25x0.75 | MRD01605 | 60x | 1.4 | | Plan Apo Lambda | 0.13 | >80% [475-725] | BF, Pol, DIC, Fluo | 0.17 | 3 | | Nikon | 100x/1.45 Oil Plan Apo Lambda Ph3 M25x0.75 | MRD31905 | 100x | 1.45 | | Plan Apo Lambda | 0.13 | >80% [475-750] | BF, Pol, PhC, Fluo | 0.17 | 4 | 100x/1.45 Oil DIC | Nikon | 100x/1.45 Oil Plan Apo Lambda DIC N2 M25x0.75 | MRD01905 | 100x | 1.45 | | Plan Apo Lambda | 0.13 | >80% [475-750] | BF, Pol, DIC, Fluo | 0.17 | 5 | 4x/0.2 Air | Nikon | 4x/0.2 Air Plan Apo Lambda M25x0.75 | MRD00045 | 4x | 0,2 | Air | Plan Apo Lambda | 20 | >80% [400-1000] | BF, Fluo | 0.17 | 6 | 20x/0.75 Air DIC | Nikon | 20x/0.75 Air Plan Apo Lambda DIC N2 M25x0.75 | MRD00205 | 20x | 0.75 | Air | Plan Apo Lambda | 1.0 | >80% [400-950] | BF, Pol, DIC, Fluo | 0.17 |
BF: Champ clair (Bright-field) Pol: Lumière polarisée PhC: Contraste de phase DIC: Contraste d'interférence différentiel |
- Cubes de filtres
DAPI GFP/FITC (CFP) Cy5 DAPI/GFP/Cy3/Cy5 (nécessite le filtre Cy3 à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX) - Analyseur DIC
CFP/YFP/mCherry (nécessite le filtre mCherry à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)
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title | Caractéristiques complètes des filtres |
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Position | Nom | Marque | Identifiant | Filtre d'excitation | Miroir dichroïque | Filtre d'émission | Commentaires |
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1 | DAPI | Nikon | DAPI-U HQ | 395/25x [383-408] | 425LP | 460/50m [435-485] | C-FL-C DAPI-U HQ | 2 | GFP | Semrock | GFP-4050B-000 | 466/40x [446-486] | 495LP | 525/50m [500-550] | Nikon ID 96372 | 3 | Cy5 | Semrock | Cy5-5070A | 617/55x [590-645] | 652LP | 697/77m [659-736] | Nikon ID 96376 | 4 | DAPI/GFP/Cy3/Cy5 | Semrock | C182279 | None | 409/493/573/652 | 432/515/595/681 | 77074160 Custom Quad C182279. Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor Spectra X | 5 | DIC Analyzer | Nikon | Ti2-C-DICACL | Not Applicable | Not Applicable | Not Applicable | Requis pour l'imagerie DIC | 6 | CFP\YFP\mCherry | Semrock | C1997767 | None | 459/526/596 | 475/543/702 | Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor Spectra X |
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- Détecteur
- Hamamatsu ORCA Flash V2 C11440-22CU CMOS Monochrome 2048 x 2048 pixels, 16-bit, 30 images/s à pleine résolution
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id | Guide d'utilisation |
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title | Guide d'utilisation |
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UI Expand |
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expanded | true |
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title | Démarrage |
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| - Allumez l’ordinateur (#1)
- Retirer la housse de protection du microscope
- Allumez la multiprise d’alimentation à droite du microscope (#2)
Si l'incubation est nécessaire, allumez le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et ouvrez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D) Warning |
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Assurez-vous que le bain-marie et l'humidificateur soient proprement remplis avec de l'eau distillée |
Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows Démarrez le logiciel NIS-Elements
Info |
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Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope dans le logiciel avant de le démarrer. Pour ce faire, suivre les instructions Paramétrage du logiciel. |
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UI Expand |
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| Sur le microscope: - Poussez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vers l'arrière
- Appuyez sur Escape (ESC) pour faire descendre les objectifs
- Sélectionnez l'objectif 4x
- Installez l'échantillon de test visible à l'oeil nu sur l'encart en vérifiant de bien mettre la lamelle du coté de l'objectif
- Centrez l'échantillon sur l'objectif à l'aide du joystick
- Remettez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vertical
- Appuyez une nouvelle fois sur Escape (ESC) pour remettre les objectifs en position normale
Dans le logiciel NIS-Elements: - Cliquez sur la configration optique Brightfield (BF)
- Cliquez sur Live (»)
- Ajustez l'intensité lumineuse et la durée d'exposition pour obtenir une image correctement exposée
Ajustez le focus pour obtenir une image nette (le focus est réalisé autour de Z=2100) Info |
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| Appuyez sur Crtl+F pour utiliser la fonction autofocus du logiciel
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- Appuyez sur Escape (ESC) pour faire descendre les objectifs
- Vous pouvez ensuite retirer l'échantillon de test et installer votre échantillon d'intérêt
- Appuyez une nouvelle fois sur Escape (ESC) pour remettre les objectifs en position normale, votre échantillon sera déjà au focus
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UI Expand |
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| - Enregistrez vos données
- Fermez le logiciel NIS-Elements
- Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
- Éteindre l'ordinateur
- Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
- Si l'incubation a été utilisée, éteindre le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et fermez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D)
- Attendre que le refroidissement du Spectra X soit terminé et éteindre la multiprise d’alimentation du microscope (#2)
- Couvrir l’instrument avec la housse de protection
Note |
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| - Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
- Laissez le microscope et l’espace de travail propre
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UI Expand |
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| - Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
- À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
- Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. A l’intérieur créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).
Note |
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Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C: |
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title | Paramétrage du logiciel |
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| Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation. Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. Note |
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Attention, cette procédurerétablira les paramètres originaux du logiciel et supprimera tous vos protocoles et paramètres personnels. |
- Si ouvert, fermez le logiciel NIS-Elements et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
- Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares
- Ouvrez le logiciel NIS Settings Utility
- Cliquez sur l’onglet Import
- Cliquez sur Browse
- Naviguez jusqu’à votre bureau
- Sélectionnez le fichier Nikon-Ti2 Settings.bin
- Cliquez Open
- Sélectionnez tous les items
- Cliquez Import
- Cliquez OK
- Fermez le logiciel NIS Settings Utility
- Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel NIS-Elements
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id | Trajet lumineux |
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title | Trajet lumineux |
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| Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, contraste de phase) et en lumière réfléchie (fluorescence).
PDF |
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name | LightPath_Nikon Ti2.pdf |
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| Manuels disponibles version anglaise.
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id | Fiche Technique |
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title | Fiche Technique |
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| Section disponible dans la version anglaise.
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id | Dépannage et FAQ |
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title | Dépannage et FAQ |
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| Dépannage
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title | Du liquide se forme dans la chambre d'incubation |
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| Cela peut survenir lorsque l'humidificateur est trop rempli. - Éteindre le module d'incubation Okolab et le bain-marie
- Enlever votre échantillon et le mettre de coté
- Sécher la chambre d'incubation avec un tissu
- Enlever délicatement le bouchon de l'humidificateur
Warning |
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Redoublez de précautions lorsque vous manipulez l'humidificateur. Il est en verre et fragile. |
- Retirer du liquide de l'humidificateur
Info |
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L'humidificateur doit être rempli au maximum au 2/3 |
- Fermez l'humidificateur en mettant le bouchon
- Rallumez le module d'incubation Okolab et le bain-marie
- Remettre votre échantillon
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FAQ
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title | Puis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture? |
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| Oui. C'est un microscope inversé conçu pour l'observation de specimen en culture (petri ou multi-puits). Les objectifs sont optimisés pour l'imagerie de plaques multi-puits à fond de verre, Il est aussi possible d'imager des specimen montés entre lame et lamelle d'épaisseur 0.17mm. Pour l'imagerie longue durée il faut être vigilant aux effets de la photo-toxicité. |
Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise. |
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