Cette procédure vous permettra permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire pour pouvoir charger votre échantillon et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure , le microscope sera prêt pour l'acquisition.
| UI Expand |
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| title | Première mise au point |
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| Sur |
le l’écran tactile du microscope : |
Tournez la molette principale d'ajustement de la mise au point pour faire descendre la platine dans sa position la plus bassePlacez votre échantillon sur la platine du microscope avec le couvre-objet vers l'objectifSélectionnez l'objectif 4x
- Appuyez sur Full Operation
Appuyez sur 4xpour sélectionner l'objectif 4x
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| Info |
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L’objectif 4x est le plus sécuritaire car il possède la plus grande distance de travail ( |
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17 5.3 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé |
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de de toujours faire la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif. |
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Sélectionnez le mode d'imagerie désiré (Champs clair ou Fluorescence). Vous trouverez dans l'onglet Trajet lumineux de cette page, les schémas qui vous permettront de suivre la lumière tout le long de son chemin au travers les différentes composantes du microscope. Ces schémas vous aideront à configurer le microscope pour le mode d'imagerie désiré.
| Info |
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Assurez-vous que la lumière soit bien visible aux oculaires avant de continuer. |
- Appuyez sur Escape pour faire monter les objectifs dans leur position la plus haute
Placez la lame de test sur la platine du microscope avec le couvre-objet vers l'objectif
| Remarque |
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| Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point. |
- Si nécessaire, déplacez la platine pour que l'échantillon soit centré sur l'objectif
Sur l’ordinateur : Ouvrez le logiciel CellSens Dimension - Attendre l'ouverture du logiciel (oui c'est long...)
En bas à droite de la fenêtre, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (DAPI, FITC, TRITC ou mCherry) pour activer la configuration Ajustez
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Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette | Remarque |
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La mise au point est aux alentours de Z = 19000 um). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile. |
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
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| UI Expand |
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| title | Mise au point secondaire |
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| note
| Avertissement |
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| Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre |
objectif et objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire. |
| UI Expand |
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| title | Mise au point avec les objectifs à air |
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| Après avoir effectué la première mise au point, sur |
le l’écran tactile du microscope : |
Sélectionnez Appuyez sur 10x, 20x ou 40x pour sélectionner l'objectif
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à air (4x, 10x, 20x, 40x ou 60x) 60x est le 40x est le meilleur objectif à Air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0. |
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8595). Il offre une résolution latérale de |
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448nm 420nm à une longueur d'onde de 550nm. |
- En bas à droite de la fenêtre, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (DAPI, FITC, TRITC ou mCherry) pour activer la configuration
Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette - Sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
- Votre échantillon est prêt pour
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l’acquisition
| UI Expand |
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| title | Mise au point avec les objectifs à l'huile |
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| Après avoir effectué la première mise au point, sur |
le | Info |
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L’objectif l’écran tactile du microscope : |
Tournez la tourelle des objectifs pour vous placer entre les objectifs 60x et 100x (cela vous laissera de la place pour l'étape suivante)
Appuyez sur 60x Oil (1.35), 100x Oil (1.4) pour sélectionner l'objectif désiré. Le microscope relèvera automatiquement les objectifs pour que l'échantillon soit accessible.
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100x est le meilleur objectif à l'huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 240nm à une longueur d'onde de 550nm. |
- Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon
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Tournez la tourelle des objectifs pour placer l'objectif 100x au dessus de l'échantillonDans le logiciel CellSens Dimension : - Cliquez sur OK
- En bas à droite de la fenêtre, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (DAPI, FITC, TRITC ou mCherry) pour activer la configuration
- Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à
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ce que - ce que l'image soit parfaitement nette
- Sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
- Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
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