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id | Description |
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title | Description |
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| Microscope inversé entièrement motorisé Nikon Ti2-EPavillon Roger Gaudry N-620, Local R-619 Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 1 Instrument octroyé au Dre Paradis-Bleau par la Fondation canadienne pour l'Innovation (FCI)
- Applications
- Lumière transmise
- Contraste de phase
- Lumière polarisée
- Fluorescence
- Imagerie en temps réel
- Imagerie longue durée
Sources lumineuses Objectifs 10x/0.3 Air Ph1 WD 16.0 40x/0.75 Air Ph2 WD 0.72 - 100x/1.3 Huile Ph3 WD 0.2
Développer |
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title | Caractéristiques complètes du Lumencor Spectra X |
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Source lumineuse | ID du Filtre | Type de filtre | Longueurs d'onde d'excitation | Fluorophores compatibles | Puissance nominale (mW) |
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Violet | 395/25 | Bandpass | [382-407] | DAPI, Hoechst | 295 | Bleu | 440/20 | Bandpass | [430-450] | CFP | 256 | Cyan | | Bandpass | [458-482] | FITC, GFP | 196 | Bleu/Vert | 510/25 | Bandpass | [497-522] | YFP | 62 | Vert/Jaune | 550/25 | Bandpass | [542-557] | TRITC, Cy3 | 260 | Vert/Jaune | 575/225 | Bandpass | [562-587] | mCherry | 310 | Rouge | 640/30 | Bandpass | [625-655] | Cy5 | 231 |
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Objectifs - 20x/0.5 Air Ph1 WD 2.1
- 60x/1.4 Oil DIC WD 0.13
- 100x/1.45 Oil Ph3 WD 0.13
- 100x/1.45 Oil DIC WD 0.13
- 4x/0.2 Air WD 20
20x/0.75 Air DIC WD 1.0
Développer |
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title | Caractéristiques complètes des objectifs |
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Position | Nom | Marque | Nom complet | Identifiant | Grossissement | Ouverture numérique | Immersion | Type | Distance de travail (mm) | TransmittanceTransmitance (% [nm]) | Technique | Épaisseur du couvre-objet (mm) |
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1 | 10x20x/0.3 5 Air Ph1 | Nikon | 10x 20x/0. 3 5 Air Plan Fluor Ph1 DLL M25x0.75
| MRH10201 | 20x10x | 0.35 | Air | Plan Fluor | 162.1 | >75% >80% [400-800750] | BF, Pol, PhC, Fluo | 0.17 | 2 | 40x60x/0.75 Air1.4 Oil DIC | Nikon | 40x/0.75 Air Plan Fluor Ph2 DLL | 40x | 0.75 | Air | Plan Fluor | 0.72 | 60x/1.4 Oil Plan Apo Lambda DIC N2 M25x0.75 | MRD01605 | 60x | 1.4 | | Plan Apo Lambda | 0.13 | >80% [475-725>80% [400-750] | BF, Pol, PhCDIC, Fluo | 0.17 | 3 | | Nikon | 100x/1.3 45 Oil Plan Fluor Ph3 DLLApo Lambda Ph3 M25x0.75 | MRD31905 | 100x | 1.345 | | Plan FluorPlan Apo Lambda | 0.213 | >75% >80% [400475-800750] | BF, Pol, PhC, Fluo | 0.17 | 4 | Vide | 5 | Vide | 6 | Vide | 100x/1.45 Oil DIC | Nikon | 100x/1.45 Oil Plan Apo Lambda DIC N2 M25x0.75 | MRD01905 | 100x | 1.45 | | Plan Apo Lambda | 0.13 | >80% [475-750] | BF, Pol, DIC, Fluo | 0.17 | 5 | 4x/0.2 Air | Nikon | 4x/0.2 Air Plan Apo Lambda M25x0.75 | MRD00045 | 4x | 0,2 | Air | Plan Apo Lambda | 20 | >80% [400-1000] | BF, Fluo | 0.17 | 6 | 20x/0.75 Air DIC | Nikon | 20x/0.75 Air Plan Apo Lambda DIC N2 M25x0.75 | MRD00205 | 20x | 0.75 | Air | Plan Apo Lambda | 1.0 | >80% [400-950] | BF, Pol, DIC, Fluo | 0.17 |
BF: Champ clair (Bright-field) Pol: Lumière polarisée PhC: Contraste de phase DIC: Contraste d'interférence différentiel |
- Cubes de filtres
DAPI /Hoechst/AMCA - FITC/EGFP
- TRITC/Rhodamine
- Texas Red
GFP/FITC (CFP) Cy5 DAPI/GFP/Cy3/Cy5 (nécessite le filtre Cy3 à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX) - Analyseur DIC
CFP/YFP/mCherry (nécessite le filtre mCherry à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)
Développer |
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title | Caractéristiques complètes des filtres |
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- Détecteur
- Hamamatsu ORCA Flash V2 C11440-22CU CMOS Monochrome 2048 x 2048 pixels, 16-bit, 30 images/s à pleine résolution
Détecteur- Caméra couleur CMOS Nikon DS-Ri2 4908 x 3264 pixels,14-bit, 6 ips
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id | Guide d'utilisation |
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title | Guide d'utilisation |
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UI Expand |
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expanded | true |
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title | Démarrage |
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| - Allumez l’ordinateur (#1)
- Retirer la housse de protection du microscope
- Allumez la multiprise d’alimentation à droite du microscope (#2)
Si la fluorescence l'incubation est nécessaire, allumez le module d’alimentation de la lampe au mercure (3Ad'incubation Okolab (#3A) et appuyez sur le bouton ignition (3B)le bain-marie (#3B) et ouvrez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D) Avertissement |
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Assurez-vous que le bain-marie et l'humidificateur soient proprement remplis avec de l'eau distillée | Avertissement |
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La lampe au mercure doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa |
Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows
- Démarrez le logiciel NIS-Elements
Info |
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Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope dans le logiciel avant de le démarrer. Pour |
cela ce faire, suivre les instructions Paramétrage |
de
Démarrez le logiciel NIS-Elements .
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UI Expand |
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title | Fermeture | | Paramétrage du logiciel |
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| Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation. Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. Remarque |
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Attention, cette procédurerétablira les paramètres originaux du logiciel et supprimera tous vos protocoles et paramètres personnels. |
- Si ouvert, fermez le logiciel NIS-Elements et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
- Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares
- Ouvrez le logiciel NIS Settings Utility
- Cliquez sur l’onglet Import
- Cliquez sur Browse
- Naviguez jusqu’à votre bureau
- Sélectionnez le fichier Nikon-Ti2 Settings.bin
- Cliquez Open
- Sélectionnez tous les items
- Cliquez Import
- Cliquez OKEnregistrez vos données
- Fermez le logiciel NIS Settings Utility
- Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel NIS-Elements
- Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
- Récupérer vos échantillons
- Si utilisé, nettoyez l’objectif à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
- Si la fluorescence a été utilisée, éteindre le module d’alimentation de la lampe au mercure (3A)
- Éteindre la multiprise d’alimentation du microscope (2)
- Attendre que les lampes aient refroidi et couvrir l’instrument avec la housse de protection
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UI Expand |
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title | Procédure pour le chargement des échantillons |
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| Cette procédure permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure le microscope sera prêt pour l'acquisition.
UI Expand |
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title | Première mise au point |
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| Sur le microscope: - Poussez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vers l'arrière
- Appuyez sur Escape (ESC) pour faire descendre les objectifs
Sélectionnez l'objectif 4x
Info |
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L’objectif 4x est le plus sécuritaire car il possède la plus grande distance de travail (5.3 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif. |
Installez l'échantillon de test visible à l'oeil nu sur l'encart en vérifiant de bien mettre la lamelle du coté de l'objectif
Remarque |
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| Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point. |
- Centrez l'échantillon sur l'objectif à l'aide du joystick
- Remettez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vertical
- Appuyez une nouvelle fois sur Escape (ESC) pour remettre les objectifs en position normale
Dans le logiciel NIS-Elements: - Cliquez sur la configration optique Brightfield (BF)
- Cliquez sur Live (»)
- Ajustez l'intensité lumineuse et la durée d'exposition pour obtenir une image correctement exposée
Ajustez le focus pour obtenir une image nette (le focus est réalisé autour de Z=2100) Remarque |
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La mise au point est aux alentours de Z = 2100um). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran de la télécommande
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UI Expand |
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title | Mise au point secondaire |
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Avertissement |
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| Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire. |
UI Expand |
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title | Mise au point avec les objectifs à air |
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| Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope : Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives Appuyez sur 20x ou 40x pour sélectionner l'objectif désiré Info |
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L’objectif 20x est le meilleur objectif à Air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0.8). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm. |
- Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
- Appuyez sur Escape (ESC) pour faire descendre les objectifs
- Vous pouvez retirer l'échantillon de test et installer votre échantillon d'intérêt
- Appuyez une nouvelle fois sur Escape (ESC) pour remettre les objectifs en position normale, votre échantillon sera déjà au focus
- Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
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UI Expand |
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title | Mise au point avec les objectifs à l'huile |
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| Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope : Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives Appuyez sur 63x Oil, 100x Oil (1.4) ou 100x Oil (1.4) pour sélectionner l'objectif désiré. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible. Info |
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L'objectif 63x est le meilleur objectif à l'huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 240nm à une longueur d'onde de 550nm. |
- Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon
- Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.
Dans le logiciel Zen Blue : - Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration
- Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition ! |
| Remarque |
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| Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscopeLaissez le microscope et l’espace de travail propreLa lampe au mercure doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa
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UI Expand |
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| - Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
- À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
- Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. A À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).
Remarque |
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Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C: |
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UI Expand |
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title | Paramétrage de NIS-Elements | Fermeture |
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| - Enregistrez vos données
- Fermez le logiciel NIS-Elements
- Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
- Éteindre l'ordinateur
- Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
- Si l'incubation a été utilisée, éteindre le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et fermez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D)
- Attendre que le refroidissement du Spectra X soit terminé et éteindre la multiprise d’alimentation du microscope (#2)
- Couvrir l’instrument avec la housse de protection
Remarque |
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| - Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
- Laissez le microscope et l’espace de travail propre
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Ancre |
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| Paramétrage de NIS-Elements | Paramétrage de NIS-Elements | Cette procédure est requise lors de la première utilisation de l'instrument. Habituellement cela sera fait lors de la séance de formation. Il est cependant possible de refaire cette procédure si le logiciel n'apparait pas correctement et si vous souhaitez rétablir les paramètres originaux. Remarque |
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Cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres pour le microscope. | Fermez le logiciel NIS-ElementsAttendre la fermeture complète du logiciel NIS-ElementsOuvrez le dossier Bureau\LogicielsOuvrez le logiciel NIS Settings UtilityCliquez sur l’onglet ImportCliquez sur BrowseNaviguez jusqu’à votre bureauSélectionnez le fichier Nikon-E600 Settings.binCliquez OpenSélectionnez tous les itemsCliquez Import Cliquez OKFermez le logiciel NIS Settings UtilityOuvrez le logiciel NIS-Elements
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id | Trajet lumineux |
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title | Trajet lumineux |
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| Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, contraste de phase et lumière polarisée) et en lumière réfléchie (fluorescence).Schémas du trajet lumineux
PDF |
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name | LightPath_Nikon Ti2.pdf |
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| Manuels disponibles version anglaise.
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id | Fiche Technique |
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title | Fiche Technique |
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| Section disponible dans la version anglaise.
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id | Dépannage et FAQ |
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title | Dépannage et FAQ |
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| Dépannage
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expanded | true |
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title | Dépannage |
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| Le logiciel NIS-Elements affiche un message d'erreur: Camera Driver... Ceci peut survenir lorsque le logiciel NIS-Elements ne parvient pas à établir la connexion avec la caméra par exemple lorsque la caméra n'est pas allumée. Fermez le logiciel NIS-ElementsAllumez la caméra (la multiprise du microscope et l'interrupteur sur le dessus de la caméra)Vérifiez la connexion USB entre la caméra et l'ordinateurAllumez le logiciel NIS-Elementstitle | Du liquide se forme dans la chambre d'incubation |
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| Cela peut survenir lorsque l'humidificateur est trop rempli. - Éteindre le module d'incubation Okolab et le bain-marie
- Enlever votre échantillon et le mettre de coté
- Sécher la chambre d'incubation avec un tissu
- Enlever délicatement le bouchon de l'humidificateur
Avertissement |
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Redoublez de précautions lorsque vous manipulez l'humidificateur. Il est en verre et fragile. |
- Retirer du liquide de l'humidificateur
Info |
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L'humidificateur doit être rempli au maximum au 2/3 |
- Fermez l'humidificateur en mettant le bouchon
- Rallumez le module d'incubation Okolab et le bain-marie
- Remettre votre échantillon
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FAQ
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title | FAQ | Puis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture? |
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| Non Oui. C'est un microscope droit inversé conçu pour l'observation de spécimen specimen en culture (petri ou multi-puits). Les objectifs sont optimisés pour l'imagerie de plaques multi-puits à fond de verre, Il est aussi possible d'imager des specimen montés entre lame et lamelles (lamelle d'épaisseur 0.17mm ). Pour l'imagerie longue durée il faut être vigilant aux effets de la photo-toxicité. |
Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise. |
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