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idInstrument Tabs
titleNikon Ti2-E
directionhorizontal


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idDescription
titleDescription


Microscope inversé

entièrement motorisé

Nikon Ti2-E

Pavillon Roger Gaudry N-620, Local R-619
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 1

Instrument octroyé au Dre Paradis-Bleau par la Fondation canadienne pour l'Innovation (FCI)

 

  • Applications
    • Lumière transmise
    • Contraste de phase
    • Lumière polarisée
    • Fluorescence
    • Imagerie en temps réel
    • Imagerie longue durée

  • Sources lumineuses

    • Lampe halogène LED pour la lumière transmise

    • Lampe au mercure (350~600nm) pour la fluorescence 

  • Objectifs

    • 10x/0.3 Air Ph1 WD 16.0

    • 40x/0.75 Air Ph2 WD 0.72

    • 100x/1.3 Huile Ph3 WD 0.2

    • Lumencor Spectra X pour la fluorescence

Développer
titleCaractéristiques complètes du Lumencor Spectra X


Source lumineuseID du FiltreType de filtreLongueurs d'onde d'excitationFluorophores compatiblesPuissance nominale
(mW)
Violet395/25Bandpass[382-407]DAPI, Hoechst295
Bleu

440/20

Bandpass[430-450]CFP

256

Cyan

470/24

Bandpass[458-482]

FITC, GFP

196
Bleu/Vert510/25Bandpass[497-522]

YFP

62

Vert/Jaune550/25Bandpass[542-557]TRITC, Cy3260
Vert/Jaune575/225Bandpass[562-587]mCherry310
Rouge640/30Bandpass[625-655]Cy5231



  • Objectifs

    1. 20x/0.5 Air Ph1 WD 2.1
    2. 60x/1.4 Oil DIC WD 0.13
    3. 100x/1.45 Oil Ph3 WD 0.13
    4. 100x/1.45 Oil DIC WD 0.13
    5. 4x/0.2 Air WD 20

    6. 20x/0.75 Air DIC WD 1.0

Développer
titleCaractéristiques complètes des objectifs


Vide
PositionNomMarqueNom completIdentifiantGrossissementOuverture numériqueImmersionTypeDistance de travail (mm)TransmittanceTransmitance
(% [nm])		TechniqueÉpaisseur du couvre-objet (mm)
110x20x/0.3 5 Air Ph1Nikon10x

20x/0.

3

5 Air
Plan Fluor Ph1

DLL


M25x0.75

MRH1020120x10x0.35AirPlan Fluor162.1>75% >80% [400-800750]BF, Pol, PhC, Fluo0.17
2

40x60x/0.75 Air1.4 Oil DIC

Nikon40x/0.75 Air Plan Fluor Ph2 DLL40x

0.75

Air

Plan Fluor0.7260x/1.4 Oil
Plan Apo Lambda DIC N2
M25x0.75		MRD0160560x

1.4


Remarque
Oil


Plan Apo Lambda0.13>80% [475-725>80% [400-750]BF, Pol, PhCDIC, Fluo0.17
3

100x/1.3 Huile45 Oil Ph3

Nikon100x/1.3 45 Oil
Plan Fluor Ph3 DLLApo Lambda Ph3
M25x0.75		MRD31905

100x

1.345


Remarque
HuileOil


Plan FluorPlan Apo Lambda0.213>75% >80% [400475-800750]BF, Pol, PhC, Fluo0.17
4Vide5Vide6100x/1.45 Oil DICNikon100x/1.45 Oil
Plan Apo Lambda DIC N2
M25x0.75		MRD01905

100x

1.45


Remarque
Oil


Plan Apo Lambda0.13>80% [475-750]BF, Pol, DIC, Fluo0.17
54x/0.2 AirNikon4x/0.2 Air
Plan Apo Lambda
M25x0.75

MRD00045

4x0,2AirPlan Apo Lambda20>80% [400-1000]BF, Fluo0.17
620x/0.75 Air DICNikon20x/0.75 Air
Plan Apo Lambda DIC N2
M25x0.75		MRD0020520x0.75AirPlan Apo Lambda

1.0

>80% [400-950]BF, Pol, DIC, Fluo0.17

BF: Champ clair (Bright-field)
Pol: Lumière polarisée
PhC: Contraste de phase
DIC: Contraste d'interférence différentiel


  • Cubes de filtres

    1. DAPI

    /Hoechst/AMCA
  • FITC/EGFP
  • TRITC/Rhodamine
  • Texas Red

    2. GFP/FITC (CFP)

    3. Cy5

    4. DAPI/GFP/Cy3/Cy5 (nécessite le filtre Cy3 à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)

    5. Analyseur DIC

    6. CFP/YFP/mCherry (nécessite le filtre mCherry à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)

Développer
titleCaractéristiques complètes des filtres


PositionNomMarqueIdentifiantExcitation Filtre d'excitation Miroir dichroïqueÉmissionFiltre d'émissionCommentaires
1DAPI/Hoechst/AMCAChromaCube set 31000v2350/50x [325-375]NikonDAPI-U HQ395/25x
[383-408]		425LP400LP460/50m 
[435-485]		C-FL-C DAPI-U HQ
2FITC/EGFPGFPChromaCube set 41001

480/40x [420-500]

505LP

535/50m [510-560]
3TRITC/RhodamineChroma

Cube set 41002c

545/30x [530-560]570LP620/60m [590-650]
4Texas RedChroma

Cube set 41004

560/55x [532-588]

595LP645/75m [607-682]
5Vide6Vide
SemrockGFP-4050B-000

466/40x
[446-486]

495LP

525/50m
[500-550]		Nikon ID 96372
3Cy5Semrock

Cy5-5070A

617/55x
[590-645]		652LP697/77m
[659-736]		Nikon ID 96376
4

DAPI/GFP/Cy3/Cy5

Semrock

C182279

None

409/493/573/652432/515/595/68177074160 Custom Quad C182279.
Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor Spectra X 
5

DIC Analyzer

NikonTi2-C-DICACLNot ApplicableNot ApplicableNot ApplicableRequis pour l'imagerie DIC
6

CFP\YFP\mCherry

SemrockC1997767None459/526/596

475/543/702

Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor Spectra X 



  • Détecteur
    • Hamamatsu ORCA Flash V2 C11440-22CU CMOS Monochrome 2048 x 2048 pixels, 16-bit, 30 images/s à pleine résolution
    Détecteur
    • Caméra couleur CMOS Nikon DS-Ri2 4908 x 3264 pixels,14-bit, 6 ips


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idGuide d'utilisation
titleGuide d'utilisation


UI Expand
expandedtrue
titleDémarrage
  1. Allumez l’ordinateur (#1)
  2. Retirer la housse de protection du microscope
  3. Allumez la multiprise d’alimentation à droite du microscope (#2)

  4. Si la fluorescence l'incubation est nécessaire, allumez le module d’alimentation de la lampe au mercure (3Ad'incubation Okolab (#3A) et appuyez sur le bouton ignition (3B)le bain-marie (#3B) et ouvrez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D)

    Avertissement

    Assurez-vous que le bain-marie et l'humidificateur soient proprement remplis avec de l'eau distillée

    Avertissement

    La lampe au mercure doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa


  5. Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows

  6. Démarrez le logiciel NIS-Elements
  7. Info

    Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope dans le logiciel avant de le démarrer. Pour

cela

  1. ce faire, suivre les instructions Paramétrage

de

  1. du logiciel.


  2. Démarrez le logiciel NIS-Elements

.




UI Expand
titleFermetureParamétrage du logiciel

Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. 

Remarque

Attention, cette procédurerétablira les paramètres originaux du logiciel et supprimera tous vos protocoles et paramètres personnels.

  1. Si ouvert, fermez le logiciel NIS-Elements et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
  2. Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares
  3. Ouvrez le logiciel NIS Settings Utility
  4. Cliquez sur l’onglet Import
  5. Cliquez sur Browse
  6. Naviguez jusqu’à votre bureau
  7. Sélectionnez le fichier Nikon-Ti2 Settings.bin
  8. Cliquez Open
  9. Sélectionnez tous les items
  10. Cliquez Import
  11. Cliquez OKEnregistrez vos données
  12. Fermez le logiciel NIS Settings Utility
  13. Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel NIS-Elements
  14. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
  15. Récupérer vos échantillons
  16. Si utilisé, nettoyez l’objectif à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
  17. Si la fluorescence a été utilisée, éteindre le module d’alimentation de la lampe au mercure (3A)
  18. Éteindre la multiprise d’alimentation du microscope (2)
  19. Attendre que les lampes aient refroidi et couvrir l’instrument avec la housse de protection


UI Expand
titleProcédure pour le chargement des échantillons

Cette procédure permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure le microscope sera prêt pour l'acquisition.


UI Expand
titlePremière mise au point

Sur le microscope:

  1. Poussez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vers l'arrière
  2. Appuyez sur Escape (ESC) pour faire descendre les objectifs

  3. Sélectionnez l'objectif 4x

    Info

    L’objectif 4x est le plus sécuritaire car il possède la plus grande distance de travail (5.3 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.


  4. Installez l'échantillon de test visible à l'oeil nu sur l'encart en vérifiant de bien mettre la lamelle du coté de l'objectif

    Remarque
    titleImportant

    Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point.


  5. Centrez l'échantillon sur l'objectif à l'aide du joystick
  6. Remettez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vertical
  7. Appuyez une nouvelle fois sur Escape (ESC) pour remettre les objectifs en position normale

Dans le logiciel NIS-Elements:

  1. Cliquez sur la configration optique Brightfield (BF)
  2. Cliquez sur Live (»)
  3. Ajustez l'intensité lumineuse et la durée d'exposition pour obtenir une image correctement exposée

  4. Ajustez le focus pour obtenir une image nette (le focus est réalisé autour de Z=2100)

    Remarque

    La mise au point est aux alentours de Z = 2100um). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran de la télécommande



UI Expand
titleMise au point secondaire


Avertissement
titleImportant

Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.


UI Expand
titleMise au point avec les objectifs à air

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 20x ou 40x pour sélectionner l'objectif désiré

    Info

    L’objectif 20x est le meilleur objectif à Air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0.8). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.


  3. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  4. Appuyez sur Escape (ESC) pour faire descendre les objectifs
  5. Vous pouvez retirer l'échantillon de test et installer votre échantillon d'intérêt
  6. Appuyez une nouvelle fois sur Escape (ESC) pour remettre les objectifs en position normale, votre échantillon sera déjà au focus
  7. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !


UI Expand
titleMise au point avec les objectifs à l'huile

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 63x Oil, 100x Oil (1.4) ou 100x Oil (1.4) pour sélectionner l'objectif désiré. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.

    Info

    L'objectif 63x est le meilleur objectif à l'huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 240nm à une longueur d'onde de 550nm.


  3. Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon
  4. Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.

Dans le logiciel Zen Blue :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration
  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination

Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

Remarque
titleRappels Importants
  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre
    • La lampe au mercure doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa




    UI Expand
    titleGestion du stockage
    • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
    • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
    • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. A À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).
    Remarque

    Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:



    Cette procédure est requise lors de la première utilisation de l'instrument. Habituellement cela sera fait lors de la séance de formation. Il est cependant possible de refaire cette procédure si le logiciel n'apparait pas correctement et si vous souhaitez rétablir les paramètres originaux.

    UI Expand
    titleParamétrage de NIS-ElementsFermeture
    1. Enregistrez vos données
    2. Fermez le logiciel NIS-Elements
    3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
    4. Éteindre l'ordinateur
    5. Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
    6. Si l'incubation a été utilisée, éteindre le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et fermez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D)
    7. Attendre que le refroidissement du Spectra X soit terminé et éteindre la multiprise d’alimentation du microscope (#2)
    8. Couvrir l’instrument avec la housse de protection
    Remarque
    titleRappels Importants
    • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
    • Laissez le microscope et l’espace de travail propre
    Ancre
    Paramétrage de NIS-ElementsParamétrage de NIS-Elements
    Remarque

    Cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres pour le microscope.

  • Fermez le logiciel NIS-Elements
  • Attendre la fermeture complète du logiciel NIS-Elements
  • Ouvrez le dossier Bureau\Logiciels
  • Ouvrez le logiciel NIS Settings Utility
  • Cliquez sur l’onglet Import
  • Cliquez sur Browse
  • Naviguez jusqu’à votre bureau
  • Sélectionnez le fichier Nikon-E600 Settings.bin
  • Cliquez Open
  • Sélectionnez tous les items
  • Cliquez Import
  • Cliquez OK
  • Fermez le logiciel NIS Settings Utility
    • Ouvrez le logiciel NIS-Elements




    Tabs Page
    idTrajet lumineux
    titleTrajet lumineux


    Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, contraste de phase et lumière polarisée) et en lumière réfléchie (fluorescence).Schémas du trajet lumineux

    PDF
    nameLightPath_Nikon Ti2.pdf


    Tabs Page
    idManuals
    titleManuels


    Manuels disponibles version anglaise.


    Tabs Page
    idLog
    titleLog


    Section disponible dans la version anglaise.


    Tabs Page
    idFiche Technique
    titleFiche Technique


    Section disponible dans la version anglaise.


    MyAnchor

    Tabs Page
    idDépannage et FAQ
    titleDépannage et FAQ


    Dépannage

    UI Expand
    expandedtrue
    titleDépannage

    Le logiciel NIS-Elements affiche un message d'erreur: Camera Driver...

    Ceci peut survenir lorsque le logiciel NIS-Elements ne parvient pas à établir la connexion avec la caméra par exemple lorsque la caméra n'est pas allumée.

    1. Fermez le logiciel NIS-Elements
    2. Allumez la caméra (la multiprise du microscope et l'interrupteur sur le dessus de la caméra)
    3. Vérifiez la connexion USB entre la caméra et l'ordinateur
    4. Allumez le logiciel NIS-Elements
    titleDu liquide se forme dans la chambre d'incubation

    Cela peut survenir lorsque l'humidificateur est trop rempli.

    • Éteindre le module d'incubation Okolab et le bain-marie
    • Enlever votre échantillon et le mettre de coté
    • Sécher la chambre d'incubation avec un tissu
    • Enlever délicatement le bouchon de l'humidificateur
    Avertissement

    Redoublez de précautions lorsque vous manipulez l'humidificateur. Il est en verre et fragile.

    • Retirer du liquide de l'humidificateur
    Info

    L'humidificateur doit être rempli au maximum au 2/3

    • Fermez l'humidificateur en mettant le bouchon
    • Rallumez le module d'incubation Okolab et le bain-marie
    • Remettre votre échantillon


    FAQ

    Ancre
    MyAnchor
    UI Expand
    FAQ
    titlePuis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture?
    Non

    Oui. C'est un microscope

    droit

    inversé conçu pour l'observation de

    spécimen

    specimen en culture (petri ou multi-puits).
    Les objectifs sont optimisés pour l'imagerie de plaques multi-puits à fond de verre,
    Il est aussi possible d'imager des specimen montés entre lame et

    lamelles (

    lamelle d'épaisseur 0.17mm

    )

    .
    Pour l'imagerie longue durée il faut être vigilant aux effets de la photo-toxicité.

    Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.




    Tabs Container
    idImage de démonstration
    titleNikon Ti2-E
    directionhorizontal


    Tabs Page
    idImage de démonstration
    titleImage de démonstration

    Image Modified

    Image Added

    Inclure page
    Plateformes:_foot
    Plateformes:_foot


    ...