Attention, cette procédurerétablira les paramètres originaux du logiciel et supprimera tous vos protocoles et paramètres personnels.

Si ouvert, fermez le logiciel NIS-Elements et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)

Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares

Ouvrez le logiciel NIS Settings Utility

Cliquez sur l’onglet Import

Cliquez sur Browse

Naviguez jusqu’à votre bureau

Sélectionnez le fichier Nikon-Ti2 Settings.bin

Cliquez Open

Sélectionnez tous les items

Cliquez Import

Cliquez OK

Fermez le logiciel NIS Settings Utility

Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel NIS-Elements

Tabs Container

id	Instrument Tabs
title	Nikon Ti2-E
direction	horizontal

Tabs Page

id	Description
title	Description

Microscope inversé Nikon Ti2-E

Pavillon Roger Gaudry, Local R-619
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 1

Instrument octroyé au Dre Paradis-Bleau par la Fondation canadienne pour l'Innovation (FCI)

Applications
- Lumière transmise
- Contraste de phase
- Lumière polarisée
- Fluorescence
- Imagerie en temps réel
- Imagerie longue durée
Sources lumineuses
- LED pour la lumière transmise
- Lumencor Spectra X pour la fluorescence

Développer

title	Caractéristiques complètes du Lumencor Spectra X

Source lumineuse	ID du Filtre	Type de filtre	Longueurs d'onde d'excitation	Fluorophores compatibles	Puissance nominale (mW)
Violet	395/25	Bandpass	[382-407]	DAPI, Hoechst	295
Bleu	440/20	Bandpass	[430-450]	CFP	256
Cyan	470/24	Bandpass	[458-482]	FITC, GFP	196
Bleu/Vert	510/25	Bandpass	[497-522]	YFP	62
Vert/Jaune	550/25	Bandpass	[542-557]	TRITC, Cy3	260
Vert/Jaune	575/225	Bandpass	[562-587]	mCherry	310
Rouge	640/30	Bandpass	[625-655]	Cy5	231

Objectifs
1. 20x/0.5 Air Ph1 WD 2.1
2. 60x/1.4 Oil DIC WD 0.13
3. 100x/1.45 Oil Ph3 WD 0.13
4. 100x/1.45 Oil DIC WD 0.13
5. 4x/0.2 Air WD 20
6. 20x/0.75 Air DIC WD 1.0

Développer

title	Caractéristiques complètes des objectifs

Position

Nom

Marque

Nom complet

Identifiant

Grossissement

Ouverture numérique

Immersion

Type

Distance de travail (mm)

Transmittance
(% [nm])

Technique

Épaisseur du couvre-objet (mm)

1

20x/0.5 Air Ph1

Nikon

20x/0.5 Air
Plan Fluor Ph1
M25x0.75

MRH10201

20x

0.5

Air

Plan Fluor

2.1

>80% [400-750]

BF, Pol, PhC, Fluo

0.17

2

60x/1.4 Oil DIC

Nikon

60x/1.4 Oil
Plan Apo Lambda DIC N2
M25x0.75

MRD01605

60x

1.4

Remarque
Oil

Plan Apo Lambda

0.13

>80% [475-725]

BF, Pol, DIC, Fluo

0.17

3

100x/1.45 Oil Ph3

Nikon

100x/1.45 Oil
Plan Apo Lambda Ph3
M25x0.75

MRD31905

100x

1.45

Remarque
Oil

Plan Apo Lambda

0.13

>80% [475-750]

BF, Pol, PhC, Fluo

0.17

4

100x/1.45 Oil DIC

Nikon

100x/1.45 Oil
Plan Apo Lambda DIC N2
M25x0.75

MRD01905

100x

1.45

Remarque
Oil

Plan Apo Lambda

0.13

>80% [475-750]

BF, Pol, DIC, Fluo

0.17

5

4x/0.2 Air

Nikon

4x/0.2 Air
Plan Apo Lambda
M25x0.75

MRD00045

4x

0,2

Air

Plan Apo Lambda

20

>80% [400-1000]

BF, Fluo

0.17

6

20x/0.75 Air DIC

Nikon

20x/0.75 Air
Plan Apo Lambda DIC N2
M25x0.75

MRD00205

20x

0.75

Air

Plan Apo Lambda

1.0

>80% [400-950]

BF, Pol, DIC, Fluo

0.17

BF: Champ clair (Bright-field)
Pol: Lumière polarisée
PhC: Contraste de phase
DIC: Contraste d'interférence différentiel

Cubes de filtres
1. DAPI
2. GFP/FITC (CFP)
3. Cy5
4. DAPI/GFP/Cy3/Cy5 (nécessite le filtre Cy3 à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)
5. Analyseur DIC
6. CFP/YFP/mCherry (nécessite le filtre mCherry à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)

Développer

title	Caractéristiques complètes des filtres

Position	Nom	Marque	Identifiant	Filtre d'excitation	Miroir dichroïque	Filtre d'émission	Commentaires
1	DAPI	Nikon	DAPI-U HQ	395/25x [383-408]	425LP	460/50m [435-485]	C-FL-C DAPI-U HQ
2	GFP	Semrock	GFP-4050B-000	466/40x [446-486]	495LP	525/50m [500-550]	Nikon ID 96372
3	Cy5	Semrock	Cy5-5070A	617/55x [590-645]	652LP	697/77m [659-736]	Nikon ID 96376
4	DAPI/GFP/Cy3/Cy5	Semrock	C182279	None	409/493/573/652	432/515/595/681	77074160 Custom Quad C182279. Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor Spectra X
5	DIC Analyzer	Nikon	Ti2-C-DICACL	Not Applicable	Not Applicable	Not Applicable	Requis pour l'imagerie DIC
6	CFP\YFP\mCherry	Semrock	C1997767	None	459/526/596	475/543/702	Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor Spectra X

Détecteur
- Hamamatsu ORCA Flash V2 C11440-22CU CMOS Monochrome 2048 x 2048 pixels, 16-bit, 30 images/s à pleine résolution

Tabs Page

id	Guide d'utilisation
title	Guide d'utilisation

UI Expand

expanded	true
title	Démarrage

Allumez l’ordinateur (#1)
Retirer la housse de protection du microscope
Allumez la multiprise d’alimentation à droite du microscope (#2)
Si l'incubation est nécessaire, allumez le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et ouvrez les bonbonnes de CO₂ (#3C) et d'azote N₂ (#3D)
Avertissement
Assurez-vous que le bain-marie et l'humidificateur soient proprement remplis avec de l'eau distillée
Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows

Démarrez le logiciel NIS-Elements

Info
Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope dans le logiciel avant de le démarrer. Pour ce faire, suivre les instructions Paramétrage du logiciel.

Démarrez le logiciel NIS-Elements

UI Expand

title	Paramétrage du logiciel

Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple.

Remarque
Attention, cette procédurerétablira les paramètres originaux du logiciel et supprimera tous vos protocoles et paramètres personnels.

Si ouvert, fermez le logiciel NIS-Elements et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares
Ouvrez le logiciel NIS Settings Utility
Cliquez sur l’onglet Import
Cliquez sur Browse
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Sélectionnez le fichier Nikon-Ti2 Settings.bin
Cliquez Open
Sélectionnez tous les items
Cliquez Import
Cliquez OK
Fermez le logiciel NIS Settings Utility
Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel NIS-Elements

Mise en placeAppuyez sur Crtl+F pour utiliser la fonction autofocus du logiciel

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title	Procédure pour le chargement des échantillons

Cette procédure permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure le microscope sera prêt pour l'acquisition.

UI Expand

title

Première mise au point

Sur le microscope:

Poussez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vers l'arrière
Appuyez sur Escape (ESC) pour faire descendre les objectifs

Sélectionnez l'objectif 4x

Info

L’objectif 4x est le plus sécuritaire car il possède la plus grande distance de travail (5.3 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.

Installez l'échantillon de test visible à l'oeil nu sur l'encart en vérifiant de bien mettre la lamelle du coté de l'objectif
Remarque
title Important
Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point.
Centrez l'échantillon sur l'objectif à l'aide du joystick
Remettez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vertical
Appuyez une nouvelle fois sur Escape (ESC) pour remettre les objectifs en position normale

Dans le logiciel NIS-Elements:

Cliquez sur la configration optique Brightfield (BF)
Cliquez sur Live (»)
Ajustez l'intensité lumineuse et la durée d'exposition pour obtenir une image correctement exposée
Ajustez le focus pour obtenir une image nette (le focus est réalisé autour de Z=2100)
Remarque
La mise au point est aux alentours de Z = 2100um)

Info

title	Truc & Astuce

. La valeur de la position en Z est visible sur l'écran de la télécommande

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title	Mise au point secondaire

Avertissement

title	Important

Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.

UI Expand

title	Mise au point avec les objectifs à air

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

Appuyez sur 20x ou 40x pour sélectionner l'objectif désiré

Info
L’objectif 20x est le meilleur objectif à Air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0.8). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.

Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Appuyez sur Escape (ESC) pour faire descendre les objectifs
Vous pouvez

ensuite

retirer l'échantillon de test et installer votre échantillon d'intérêt
Appuyez une nouvelle fois sur Escape (ESC) pour remettre les objectifs en position normale, votre échantillon sera déjà au focus
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

UI Expand

title	Mise au point avec les objectifs à l'huile

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

Appuyez sur 63x Oil, 100x Oil (1.4) ou 100x Oil (1.4) pour sélectionner l'objectif désiré. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.

Info
L'objectif 63x est le meilleur objectif à l'huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 240nm à une longueur d'onde de 550nm.

Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon
Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.

Dans le logiciel Zen Blue :

Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration
Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination

Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. A l’intérieur créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

UI Expand

title	Fermeture

Enregistrez vos données
Fermez le logiciel NIS-Elements
Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
Éteindre l'ordinateur
Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
Si l'incubation a été utilisée, éteindre le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et fermez les bonbonnes de CO₂ (#3C) et d'azote N₂ (#3D)
Attendre que le refroidissement du Spectra X soit terminé et éteindre la multiprise d’alimentation du microscope (#2)
Couvrir l’instrument avec la housse de protection

Remarque

title	Rappels Importants

Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
Laissez le microscope et l’espace de travail propre

UI Expand

title	Gestion du stockage

Remarque
Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

UI Expand

title	Paramétrage du logiciel

Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple.

Remarque

Tabs Page

id	Trajet lumineux
title	Trajet lumineux

Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, contraste de phase) et en lumière réfléchie (fluorescence).

PDF

name	LightPath_Nikon Ti2.pdf

Tabs Page

id	Manuals
title	Manuels

Manuels disponibles version anglaise.

Tabs Page

id	Log
title	Log

Section disponible dans la version anglaise.

Tabs Page

id	Fiche Technique
title	Fiche Technique

Section disponible dans la version anglaise.

Tabs Page

id	Dépannage et FAQ
title	Dépannage et FAQ

Dépannage

UI Expand

title	Du liquide se forme dans la chambre d'incubation

Cela peut survenir lorsque l'humidificateur est trop rempli.

Éteindre le module d'incubation Okolab et le bain-marie
Enlever votre échantillon et le mettre de coté
Sécher la chambre d'incubation avec un tissu
Enlever délicatement le bouchon de l'humidificateur

Avertissement
Redoublez de précautions lorsque vous manipulez l'humidificateur. Il est en verre et fragile.

Retirer du liquide de l'humidificateur

Info
L'humidificateur doit être rempli au maximum au 2/3

Fermez l'humidificateur en mettant le bouchon
Rallumez le module d'incubation Okolab et le bain-marie
Remettre votre échantillon

FAQ

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title	Puis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture?

Oui. C'est un microscope inversé conçu pour l'observation de specimen en culture (petri ou multi-puits).
Les objectifs sont optimisés pour l'imagerie de plaques multi-puits à fond de verre,
Il est aussi possible d'imager des specimen montés entre lame et lamelle d'épaisseur 0.17mm.
Pour l'imagerie longue durée il faut être vigilant aux effets de la photo-toxicité.

Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.

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id	Image de démonstration
title	Nikon Ti2-E
direction	horizontal

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id	Image de démonstration
title	Image de démonstration

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	Plateformes:_foot
	Plateformes:_foot

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Microscope inversé Nikon Ti2-E

Dépannage

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