- Created by Nicolas Stifani, last modified on Feb 16, 2024
Microscope droit Leica DM2000
Pavillon Desmarais, Local 3248Accès sur demande auprès du laboratoire de Dre Samaha
- Applications
- Lumière transmise
- Fluorescence
- Caméra couleur
Sources lumineuses
Lampe halogène 30 W pour la lumière transmise
Lampe au mercure 100 W (350~600 nm) pour la fluorescence
Pic d'émission (nm) | Puissance (mW) |
---|---|
334 | 7 |
365 | 45 |
405 | 34 |
436 | 43 |
546 | 37 |
579 | 26 |
Spectre d'émission de la lampe HBO (anglais pdf) (Source)
Comparaison entre les spectres d'émission de lampe au mercure HBO vs XCite (anglais) (Source)
Manuel Lampe OSRAM HBO 100W/2 (anglais pdf)
Objectifs
10x/0.3 Air WD 11
20x/0.5 Air WD 1.15
40x/0.75 Air WD 0.37
Position | Nom | Marque | Nom complet | Identifiant | Grossissement | Ouverture numérique | Immersion | Type | Distance de travail (mm) | Transmittance (% [nm]) | Technique | Épaisseur du couvre-objet (mm) |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
1 | 10x/0.3 Air | Leica | 10x/0.3 Air HC Plan Fluotar | 5006505 | 10x | 0.3 | Air | Plan Fluor | 11 | >80% [385-775] | BF, Fluo | 0.17 |
2 | 20x/0.5 Air | Leica | 20x/0.5 Air HC Plan Fluotar | 506503 | 20x | 0.5 | Air | Plan Fluor | 1.15 | >80% [395-800] | BF, Fluo | 0.17 |
3 | 40x/0.75 | Leica | 40x/0.75 Air HC Plan Fluotar | 506144 | 40x | 0.75 | Air | Plan Fluor | 0.37 | >80% [420-850] | BF, Fluo | 0.17 |
4 | Vide | |||||||||||
5 | Vide | |||||||||||
6 | Vide |
BF: Champ clair (Bright field)
- Cubes de filtres
- I3 (GFP, YFP)
- N2.1 (TRITC)
Position | Nom | Marque | Identifiant | Filtre d'excitation | Miroir dichroïque | Filtre d'émission | Commentaires |
---|---|---|---|---|---|---|---|
1 | I3 | Leica | I3 | 470/40 [450-490] | 510LP | 515LP [520+] | Le filtre d'émission est très large. |
2 | N2.1 | Leica | N2.1 | 537/45 | 580LP | 590LP [595+] | Le filtre d'émission est très large. Attention au chevauchement des spectres (contamination lumineuse croisée) |
3 | Vide | ||||||
4 | Vide | ||||||
5 | Vide |
- Détecteur
- Caméra couleur Leica DFC425 C 2592 × 1944 pixels, 14-bit en mode monochrome, 36-bits en mode couleurs, 6 images/s à pleine résolution
- Caméra couleur Leica DFC425 C 2592 × 1944 pixels, 14-bit en mode monochrome, 36-bits en mode couleurs, 6 images/s à pleine résolution
- Allumez l’ordinateur (#1)
Si la fluorescence est nécessaire, allumez le module d’alimentation de la lampe au mercure (#2)
La lampe au mercure doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa
Si la lumière transmise est nécessaire, allumez l’interrupteur sur le côté droit du microscope (#3)
Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows
Démarrez le logiciel LAS
Lors de la première utilisation, le logiciel LAS demande à être activé et à s'enregistrer.
- Sélectionnez: Do not tell me about this again en bas à gauche
- Cliquez sur Close
- Enregistrez vos données
- Fermez le logiciel LAS
- Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
- Éteindre l'ordinateur
Si la fluorescence a été utilisée, éteindre le module d’alimentation de la lampe au mercure (#2)
La lampe au mercure doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa
- Si la lumière transmise a été utilisée, éteindre la lampe halogène sur le côté droit du microscope (#3)
- Attendre que les lampes aient refroidies et couvrir l’instrument avec la housse de protection
Rappels Importants
- Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
- Laissez le microscope et l’espace de travail propre
- Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
- À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
- Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).
Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:
Lors de la première utilisation, le logiciel LAS demande à être activé et s'enregistrer.
- Sélectionnez: Do not tell me about this again en bas à gauche
- Cliquez sur Close
Cette procédure vous permettra de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire pour pouvoir charger votre échantillon et effectuer la mise au point. À la fin de cette procédure, le microscope sera prêt pour l'acquisition.
Première mise au point
Sur le microscope :
- Tournez la molette principale d'ajustement de la mise au point pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
- Placez votre échantillon sur la platine du microscope avec le couvre-objet vers l'objectif
Sélectionnez l'objectif 10x
L’objectif 10x est le plus sécuritaire car il possède la plus grande distance de travail (11 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.
Sélectionnez le mode d'imagerie désiré (Champs clair ou Fluorescence). Vous trouverez dans l'onglet Trajet lumineux de cette page, les schémas qui vous permettront de suivre la lumière tout le long de son chemin au travers les différentes composantes du microscope. Ces schémas vous aideront à configurer le microscope pour le mode d'imagerie désiré.
Assurez-vous que la lumière soit bien visible aux oculaires avant de continuer.
- Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Mise au point secondaire
Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.
Après avoir effectué la première mise au point, sur le microscope :
Sélectionnez l'objectif à air désiré (10x, 20x ou 40x)
L’objectif 40x est le meilleur objectif à Air car il possède la plus grande ouverture numérique (0.8). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.
- Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (champs clair) et en lumière réfléchie (fluorescence).
Manuels disponibles en version anglaise.
Section disponible dans la version anglaise.
Section disponible dans la version anglaise.
Dépannage
Ceci peut survenir lorsqu'un élément n'est pas dans la bonne configuration le long du trajet lumineux. Les schémas du trajet lumineux peuvent vous aider à identifier le problème.
- Vérifiez que l'alimentation de la lampe au mercure est allumé (#2)
- Vérifiez que la lampe au mercure située en haut à l'arrière du microscope est allumée. Elle dégage une forte chaleur. Attention aux risques de brulure.
- Vérifiez que les filtres de densité neutre (N16, N4, N2) situés en arrière sur le coté droit du microscope sont en position basse (out)
- Vérifiez que l'obturateur manuel situé en arrière sur le coté droit du microscope est en position basse (out)
- Vérifiez que les diaphragmes d'ouverture (A) et de champ (F) situés en arrière sur le coté droit du microscope sont ouverts en position haute
- Vérifiez que la tourelle de cube est sur une position non vide (1: I3 ou 2: N2.1)
FAQ
Non. C'est un microscope droit conçu pour l'observation de spécimen montés entre lame et lamelles (d'épaisseur 0.17mm).
Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.