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Microscope Zeiss LSM800

Pavillon Roger Gaudry, Local R-421
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 2
Instrument octroyé au Dr Jean-Philippe Gratton par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)

  • Applications
    • Lumière transmise
    • DIC
    • Fluorescence
    • Confocal à balayage

  • Sources lumineuses

    • Lampe halogène 12V 100W pour la lumière transmise

    • X-Cite 120LED mini pour la fluorescence visible

    • Emission peak (nm)

      Power (mW)

      334

      5



  • Objectves

    1. 5x/0.15 Ph1 Air WD 5.30 N-AchroPlan 420931-9911

    2. 10x/0.25 Ph1 WD TBD N-AchroPlan 420941-9911

    3. 20x/0.80 Air WD 0.61 Plan ApoChromat 420650-9901

    4. 40x/1.4 Oil WD TBD Plan ApoChromat 420762-9900

    5. 63x/1.40 Oil WD 0.19 Plan ApoChromat 420782-9900

    6. 40x/0.95 Air WD TBD Plan ApoChromat 420660-9970 Variable coverslip 0.13-0.21


    7. Position

      Nom

      Marque

      Nom complet

      Identifiant

      Grossissement

      Ouverture numérique

      Immersion

      Type

      Distance de travail (mm)

      Transmittance

      (% [nm])

      Technique

      Épaisseur du couvre-objet (mm)

      2

      20x/0.80
      Air

      Zeiss

      20x/0.8 DIC II

      Plan-Apochromat
      W0.8x1/36"

      440640-9903-000

      20x

      0.8

      Air

      Plan Apochromat

      0.55

      >90% [410-800]

      BF, DIC, Fluo

      0.17

      4

      63x/1.40

      Huile

      Zeiss

      63x/1.4 DIC III

      Plan-Apochromat

      M27

      420782-9900-000

      63x

      1.4


      Huile


      Plan Apochromat

      0.19

      >80% [440-710]

      BF, DIC, Fluo

      0.17

      BF: Bright-field
      DIC: Interference contrast

 

  • Filter cubes
  1. 38 GFP
  2. 49 DAPI
  3. 64 mPlum
  4. DIC Analyzer
  5. Empty
  6. Empty


  7. Position

    Nom

    Marque

    Identifiant

    Filtre d'excitation 

    Miroir dichroïque

    Filtre d'émission

    Commentaire



    1

    DAPI

    Filter Set 49

    Zeiss

    488049-9901-000

    365/50

    [340-390]

    395LP

    445/50

    [420-470]




    2

    GFP

    Filter Set 38

    Zeiss

    000000-1031-346

    470/40
    [450-490]

    495LP

    525/50

    [500-550]


    FT 495

    BP 525/50

  • Detector
    • 2 GaASP PMT

 


Démarrage

  1. Retirez la housse de protection de l'instrument

  2. Allumez l'ordinateur (#1)

  3. Allumez les interrupteurs System (#2) et Components (#3) dans le rack à gauche du microscope

  4. Tournez la clé des lasers sur ON (#4) dans le support à gauche du microscope

  5. Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows

    Lors de la première utilisation, il est nécessaire d'importer les paramètres spécifiques au microscope AVANT de démarrer le logiciel. Voir la section Première utilisation ci-dessous.
  6. Démarrez le logiciel Zen Blue 
Première utilisation

Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. 

Attention, cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres originaux du logiciel.

  1. Si ouvert, fermez le logiciel Zen Blue et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
  2. Sur le Bureau ouvrez le dossier Documentation
  3. Double-cliquez sur Settings for LSM800
  4. Un script s'exécutera et une fenêtre noire apparaîtra brièvement
  5. Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel Zen Blue
Chargement des échantillons
Cette procédure met le microscope dans une configuration sûre et effectue un étalonnage de la mise au point. A la fin de cette procédure, le microscope sera prêt pour l'acquisition.
Calibration de la mise au point (Z)

Sur l'écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre les objetifs dans leur position la plus basse
  2. Appuyez sur Set Work Position pour enregistrer cette position
  3. Si nécessaire, déplacez le focus légèrement vers le haut pour supprimer le message “Lower Z limit reached” affiché sur l'écran tactile
  4. Appuyez sur Home>Microscope>Control>Objectives>5x pour sélectionner l'objectif 5x objective
  5. Si demandé, appuyez sur Done pour supprimer l'avertissement de nettoyage de l'huile
  6. Appuyez sur Home>Microscope>XYZ>Position>Z-Position>Set zero>Auto pour effectuer la calibration de la mise au point
  7. Appuyez sur OK tpour démarrer la procédure de calibration de la mise au point
  8. Attendez quelques secondes que la calibration se termine

Une fois calibré, le focus se trouve à Z = 1,6 mm. La valeur Z se trouve sur l'écran tactile du microscope Accueil>Z-Position

Première mise au point

Important

Faire d’abord la calibration de la mise au point avant d'effectuer la première mise au point.

Sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 5xpour sélectionner l'objectif 5x

    L’objectif 5x est le plus sécuritaire car il possède une grande distance de travail (TBD mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec un objectif sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.

  3. Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
  4. Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
  5. Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile

  6. Placez la lame de test sur la platine du microscope avec le couvre-objet vers l'objectif

    Important

    Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point.

  7. Si nécessaire, déplacez la platine pour que l'échantillon soit centré sur l'objectif

Sur l’ordinateur :

  1. Ouvrez le logiciel Zen

  2. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (DAPI, GFP, mPlum) pour activer la configuration

  3. Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette

    Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z = 1.6 mm). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position

  4. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Mise au point secondaire

Important

Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.

Mise au point avec les objectifs à air

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 20x ou 40x pour sélectionner l'objectif désiré

    Il y a deux (2) objectifs 40x, assurez-vous de sélectionner celui à Air

    L’objectif 40x est le meilleur objectif à Air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0.95). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.

  3. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  4. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Mise au point avec les objectifs à l'huile

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur l'objectif désiré 63x Oil ou 40x Oil. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.

    Il y a deux (2) objectifs 40x, assurez-vous de sélectionner celui à Air

  3. Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon
  4. Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.

Dans le logiciel Zen :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (DAPI, GFP, mPlum) pour activer la configuration
  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
  4. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !



Gestion du stockage
  • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
  • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
  • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

Fermeture
  1. Enregistrez vos données
  2. Fermez le logiciel Zen
  3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
  4. Si utilisé, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du paper à lentille
  5. Sélectionner l'objectif 5x et remettre les objectifs en position basse (Load position)
  6. Tournez la clé des lasers (#4) sur Off dans le module à gauche du microscope
  7. Éteindre l'interrupteur System (#2) et Components (#3) dans le module à gauche du microscope
  8. Éteindre l'ordinateur
  9. Couvrir l’instrument avec la housse de protection

Rappels Importants

  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre



The following diagrams allow you to follow the light path in transmitted light (bright field, DIC) and in reflected light (fluorescence).
Section disponible dans la version anglaise.

Dépannage

Je ne vois pas de fluoescence! Que faire?

La meilleure façon de résoudre un problème en microscopie est de suivre le chemin de la lumière. Vous trouverez dans l'onglet Parcours lumineux de cette page, les schémas qui vous permettront de suivre la lumière tout au long de son trajet à travers le microscope. Ouvrez le fichier Light Path En partant de la source lumineuse et en vous dirigeant vers le détecteur, vérifiez qu'il y a bien de la lumière après chaque composant du microscope

FAQ

Puis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture?

Oui. C'est un microscope inversé conçu pour l'observation de spécimen en cultures. Les objectifs sont optimisés pour observer au travers de plaque multi-puits à fond de verre. Il est également possible d'observer des échantillons entre lame et lamelles (d'épaisseur 0.17mm).


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