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idDescription
titleDescription

Microscope droit Nikon 90i

Pavillon Roger Gaudry, Local R-619
Instrument gracieusement partagé sur la plateforme par le Dr Yves Brun

  • Applications
    • Lumière transmise
    • Contraste de phase
    • Lumière polarisée
    • Fluorescence
    • Imagerie d'échantillons montés entre lame et lamelle

  • Sources lumineuses

    • Lampe halogène pour la lumière transmise

    • Lampe au mercure X-Cite 120Q 100 W (350~600 nm) pour la fluorescence

Caractéristiques  
Développer
titleCaractéristiques complètes du Lumencor Spectra X
 Caractéristiques complètes de la lampe X-Cite


Pic d'émission (nm)

Puissance (mW)

3345
36520
40519
43622
54621
57918

Guide de démarrage rapide X-Cite (anglais pdf)
Guide d'utilisation X-Cite (anglais pdf)
Comparaison entre les spectres d'émission de lampe au mercure HBO vs X-Cite (anglais) (Source)



  • Objectifs

    1. 2x/0.1 Air WD 8.5
    2. 60x/1.4 Oil DIC WD 0.13
    3. 40x/0.65 Air WD 0.65
    4. 100x/1.4 Oil Ph3 WD 0.17
    5. Empty
    6. 100x/1.4 Oil DIC WD 0.17
Développer
titleCaractéristiques complètes des objectifs


PositionNomMarqueNom completIdentifiantGrossissementOuverture numériqueImmersionTypeDistance de travail (mm)Transmittance
(% [nm])		TechniqueÉpaisseur du couvre-objet (mm)
12x/0.1 AirNikon

2x/0.1 Air
Plan Apo
M25x0.75

MRD700202x0.1AirPlan Apo8.5>90% [400-1000]BF,Pol, PhC, Fluo0 - 0.17
2

60x/1.4 Oil DIC

Nikon60x/1.4 Oil
Plan Apo VC
DIC N2
M25x0.75
60x

1.4


Remarque
Oil


Plan Apo VC0.13
BF, Pol, DIC, Fluo0.17
3

40x/0.65 Air Ph2

Nikon40x/0.65 Air
Ph2 DL
M25x0.75		MRD31905

40x

0.65


Remarque
Oil


Plan Apo Lambda0.65>80% [475-750]BF, Pol, PhC, Fluo0.17
4100x/1.45 Oil DICNikon100x/1.45 Oil
Plan Apo Lambda DIC N2
M25x0.75		MRD01905

100x

1.45


Remarque
Oil


Plan Apo Lambda0.13>80% [475-750]BF, Pol, DIC, Fluo0.17
54x/0.2 AirNikon4x/0.2 Air
Plan Apo Lambda
M25x0.75

MRD00045

4x0,2AirPlan Apo Lambda20>80% [400-1000]BF, Fluo0.17
620x/0.75 Air DICNikon20x/0.75 Air
Plan Apo Lambda DIC N2
M25x0.75		MRD0020520x0.75AirPlan Apo Lambda

1.0

>80% [400-950]BF, Pol, DIC, Fluo0.17

BF: Champ clair (Bright-field)
Pol: Lumière polarisée
PhC: Contraste de phase
DIC: Contraste d'interférence différentiel


  • Filtres d'excitation

    1. D350/50 x 112717 325-375

    2. S403/12 x 66825 397-409
    3. 492/18 x 29538 483-501
    4. S572/23 x 66750 560-583
    5. S436/10x 66893 431-441
    6. S500/20 x 66729 490-510
    7. 83103 x 53940
    8. 83102 x 65557
    9. Vide
    10. Bloque
    Cubes de filtres

    1. DAPI

    2. GFP/FITC (CFP)

    3. Cy5

    4. DAPI/GFP/Cy3/Cy5 (nécessite le filtre Cy3 à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)

    5. Analyseur DIC
    6. CFP/YFP/mCherry (nécessite le filtre mCherry à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)


Développer
titleCaractéristiques complètes des filtres d'excitation


PositionNomMarqueIdentifiantFiltre d'excitation Miroir dichroïqueFiltre d'émissionCommentaires
1DAPINikonDAPI-U HQ395/25x
[383-408]		425LP460/50m
[435-485]		C-FL-C DAPI-U HQ
2GFPSemrockGFP-4050B-000

466/40x
[446-486]

495LP

525/50m
[500-550]		Nikon ID 96372
3Cy5Semrock

Cy5-5070A

617/55x
[590-645]		652LP697/77m
[659-736]		Nikon ID 96376
4

DAPI/GFP/Cy3/Cy5

Semrock

C182279

None

409/493/573/652432/515/595/68177074160 Custom Quad C182279.
Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor Spectra X 
5

DIC Analyzer

NikonTi2-C-DICACLNot ApplicableNot ApplicableNot ApplicableRequis pour l'imagerie DIC
6

CFP\YFP\mCherry

SemrockC1997767None459/526/596

475/543/702

Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor Spectra X 


350/50x
[325-375]
2


403/12x
[397-409]


3GFP


492/18x
[483-501]
4

TRITC



572/23x
[560-583]


5

CFP



436/10
[431-441]
6

YFP



500/20
[490-510]
783103 x 53940



883102 x 65557



9Vide



10Bloque





  • Cubes de filtres

    1. Dichroique DAPI/FITC/TRITC 83700

    2. Dichroique CFP/YFP 86002v1 JP4 C76403
    3. Dichroique et mutli-bande d'emission CFP/YFP 51017BS C76404

    4. Dichroique et mutli-bande d'emission UV/D/F/TR 83000v2 

    5. Vide

    6. Vide


Développer
titleCaractéristiques complètes des cubes


PositionNomMarqueIdentifiantFiltre d'excitation Miroir dichroïqueFiltre d'émissionCommentaires
1DAPI/FITC/TRITC
83700None
None
2CFP/YFP
86002v1

None


None
3CFP/YFP

51017BS 

NoneMultibandeMultibande
4

UV/D/F/TR


83000v2

None

MultibandeMultibande
5

Vide







6

Vide









  • Filtres d'emission 

    1. S460/36 M 51088 442-478

    2. S530/35 m 61364 512-548

    3. S630/60 m 65953 600-660

    4. S470/30 m 66705 455-485

    5. S535/30 M 66767 520-550

    6. Vide
    7. Vide
    8. Vide
    9. Vide
    10. Vide
Développer
titleCaractéristiques complètes des filtres d'émission


PositionNomMarqueIdentifiantFiltre d'émissionCommentaires
1DAPI

460/36m
[442-478]
2FITC

530/35m
[512-548]
3TRITC


630/60m
[600-660]
4

CFP



470/30m
[455-485]
5

YFP



535/30m
[520-550]
6

Vide





7Vide



8Vide



9Vide



10Vide





  • Détecteur
    • Andor iXonEM+ DU-885K-CS0-#VP Back-illuminated EMCCD Monochrome 1004 x 1002 pixels, 14
    Détecteur


Assurez-vous que le bain-marie et l'humidificateur soient proprement remplis avec de l'eau distillée
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idGuide d'utilisation
titleGuide d'utilisation


UI Expand
expandedtrue
titleDémarrage
  1. Allumez l’ordinateur (#1)
  2. Retirer la housse de protection du microscope
  3. Allumez la multiprise d’alimentation à droite du microscope (#2)

Si l'incubation est nécessaire, allumez le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et ouvrez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D)

  1. Allumez la source lumineuse X-cite 120Q (#3) et ouvrir l'iris d'intensité (#4)

    Avertissement

    La lampe X-cite doit etre allumer pour 30min et vice-versa

Avertissement


  2. Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows

  3. Démarrez le logiciel NIS-Elements

    Info

    Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope dans le logiciel avant de le démarrer. Pour ce faire, suivre les instructions Paramétrage du logiciel.



UI Expand
titleMise en place

Sur le microscope:

  • Poussez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vers l'arrière
    1. Appuyez sur Escape pour faire descendre
    les objectifs
    1. la platine
    2. Sélectionnez l'
    objectif 4x
    1. objectif  de plus faible grossissement
    2. Installez l'échantillon de test visible à l'oeil nu sur l'encart en vérifiant de bien mettre la lamelle du coté de l'objectif
    3. Centrez l'échantillon sur l'objectif à l'aide du joystick
    Remettez délicatement le bras de la lumière transmise du microscope vertical
    2. Appuyez une nouvelle fois sur Escape pour désengager le mécanisme de protection des objectifs

    Dans le logiciel NIS-Elements:

    1. Cliquez sur la configration optique Brightfield
    2. Cliquez sur Live
    3. Ajustez l'intensité lumineuse et la durée d'exposition pour obtenir une image correctement exposée
    4. Ajustez le focus pour obtenir une image nette
    5. Vous pouvez ensuite retirer l'échantillon de test et installer votre échantillon d'intérêt qui sera déjà au focus


    UI Expand
    titleFermeture
    1. Enregistrez vos données
    2. Fermez le logiciel NIS-Elements
    3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
    4. Éteindre l'ordinateur
    5. Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
  • Si l'incubation a été utilisée, éteindre le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et fermez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D)
    1.  Éteindre la source lumineuse XCite 120 Q
    2. Éteindre la mutliprise d'alimentation #2
    Attendre que le refroidissement du Spectra X soit terminé et éteindre la multiprise d’alimentation du microscope (#2)
    2. Couvrir l’instrument avec la housse de protection
    Remarque
    titleRappels Importants
    • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
    • Laissez le microscope et l’espace de travail propre



    UI Expand
    titleGestion du stockage
    • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
    • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
    • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. A l’intérieur créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).
    Remarque

    Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:



    UI Expand
    titleParamétrage du logiciel

    Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
    Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. 

    Remarque

    Attention, cette procédurerétablira les paramètres originaux du logiciel et supprimera tous vos protocoles et paramètres personnels.

    1. Si ouvert, fermez le logiciel NIS-Elements et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
    2. Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares
    3. Ouvrez le logiciel NIS Settings Utility
    4. Cliquez sur l’onglet Import
    5. Cliquez sur Browse
    6. Naviguez jusqu’à votre bureau
    7. Sélectionnez le fichier Nikon-
    Ti2
    1. 90i Settings.bin
    2. Cliquez Open
    3. Sélectionnez tous les items
    4. Cliquez Import
    5. Cliquez OK
    6. Fermez le logiciel NIS Settings Utility
    7. Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel NIS-Elements



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    idTrajet lumineux
    titleTrajet lumineux


    Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, contraste de phase) et en lumière réfléchie (fluorescence).

    PDF
    nameLightPath_Nikon Ti2.pdf


    Tabs Page
    idManuals
    titleManuels


    Manuels disponibles version anglaise.

  • Lumencor SpectraX Manual (anglais pdf)
  • Lumencor SpectraX Filter recommandation (anglais pdf)
  • Lumencor SpectraX Brochure (anglais pdf)
  • Nikon Ti2 Brochure (anglais pdf)
    • Hamamatsu ORCA Flash 4

    .

    0 V2 Instruction Manual (anglais pdf)Hamamatsu Orca Flash 4.0 V2 C11440-22CU Technical Note (anglais pdf)


    Tabs Page
    idLog
    titleLog


    Section disponible dans la version anglaise.


    Tabs Page
    idFiche Technique
    titleFiche Technique


    Section disponible dans la version anglaise.


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    idDépannage et FAQ
    titleDépannage et FAQ

    Dépannage

    UI Expand
    titleDu liquide se forme dans la chambre d'incubationÀ l'ouverture du logiciel un message d'erreur apparait: Camera driver not found

    Cela peut survenir lorsque l'humidificateur est trop rempli.

    • Éteindre le module d'incubation Okolab et le bain-marie
    • Enlever votre échantillon et le mettre de coté
    • Sécher la chambre d'incubation avec un tissu
    • Enlever délicatement le bouchon de l'humidificateur
    Avertissement

    Redoublez de précautions lorsque vous manipulez l'humidificateur. Il est en verre et fragile.

    • Retirer du liquide de l'humidificateur
    Info

    L'humidificateur doit être rempli au maximum au 2/3

    • Fermez l'humidificateur en mettant le bouchon
    • Rallumez le module d'incubation Okolab et le bain-marie
    • Remettre votre échantillon

    ordinateur est démarré avant la camera.

    • Redémarrer l'ordinateur seulement

    FAQ

    UI Expand
    titlePuis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture?

    OuiNon. C'est un microscope inversé droit conçu pour l'observation de specimen en culture (petri ou multi-puits).
    Les objectifs sont optimisés pour l'imagerie de plaques multi-puits à fond de verre,
    Il est aussi possible d'imager des specimen montés entre lame et lamelle d'épaisseur 0.17mm.
    Pour l'imagerie longue durée il faut être vigilant aux effets de la photo-toxicité.

    Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.











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    idImage de démonstration
    titleNikon Ti2-E
    directionhorizontal


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    idImage de démonstration
    titleImage de démonstration







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    Plateformes:_foot
    Plateformes:_foot