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Microscope inversé Nikon Ti2-E

Pavillon Roger Gaudry, Local N-620

  • Applications
    • Lumière transmise
    • Contraste de phase
    • Lumière polarisée
    • Fluorescence
    • Imagerie en temps réel
    • Imagerie longue durée

  • Sources lumineuses

    • LED pour la lumière transmise

    • Lumencor Spectra X pour la fluorescence

Source lumineuseID du FiltreType de filtreLongueurs d'onde d'excitationFluorophores compatiblesPuissance nominale
(mW)
Violet395/25Bandpass[382-407]DAPI, Hoechst295
Bleu

440/20

Bandpass[430-450]CFP

256

Cyan

470/24

Bandpass[458-482]

FITC, GFP

196
Bleu/Vert510/25Bandpass[497-522]

YFP

62

Vert/Jaune550/25Bandpass[542-557]TRITC, Cy3260
Vert/Jaune575/225Bandpass[562-587]mCherry310
Rouge640/30Bandpass[625-655]Cy5231

  • Objectifs

    1. 20x/0.5 Air Ph1 WD 2.1
    2. 60x/1.4 Oil DIC WD 0.13
    3. 100x/1.45 Oil Ph3 WD 0.13
    4. 100x/1.45 Oil DIC WD 0.13
    5. 4x/0.2 Air WD 20

    6. 20x/0.75 Air DIC WD 1.0

PositionNomMarqueNom CompletIdentifiant produitGrossissementOuverture numériqueImmersionTypeDistance de travail (mm)Transmittance
(% [nm])		TechniqueÉpaisseur du couvre-objet (mm)
120x/0.5 Air Ph1Nikon

20x/0.5 Air Plan Fluor Ph1

MRH1020120x0.5AirPlan Fluor2.1>80% [400-750]BF, Pol, PhC, Fluo0.17
2

60x/1.4 Oil DIC

Nikon60x/1.4 Oil Plan Apo Lambda DIC N2MRD0160560x

1.4

Oil
Plan Apo Lambda0.13>80% [475-725]BF, Pol, DIC, Fluo0.17
3

100x/1.45 Oil Ph3

Nikon100x/1.45 Oil Plan Apo Lambda Ph3MRD31905

100x

1.45
Oil
Plan Apo Lambda0.13>80% [475-750]BF, Pol, PhC, Fluo0.17
4100x/1.45 Oil DICNikon100x/1.45 Oil Plan Apo Lambda DIC N2MRD01905

100x

1.45

Oil
Plan Apo Lambda0.13>80% [475-750]BF, Pol, DIC, Fluo0.17
54x/0.2 AirNikon4x/0.2 Air Plan Apo Lambda

MRD00045

4x0,2AirPlan Apo Lambda20>80% [400-1000]BF, Fluo0.17
620x/0.75 Air DICNikon20x/0.75 Air Plan Apo Lambda DIC N2MRD0020520x0.75AirPlan Apo Lambda

1.0

>80% [400-950]BF, Pol, DIC, Fluo0.17
  • Cubes de filtres

    1. DAPI

    2. GFP/FITC (CFP)

    3. Cy5

    4. DAPI/GFP/Cy3/Cy5 (nécessite le filtre Cy3 à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)

    5. Analyseur DIC

    6. CFP/YFP/mCherry (nécessite le filtre mCherry à la position Verte/Jaune du Lumencor SpectraX)

PositionNomMarqueIdentifiantExcitation Miroir dichroïqueÉmissionCommentaires
1DAPINikonDAPI-U HQ395/25x [383-408]425LP460/50m [435-485]C-FL-C DAPI-U HQ
2GFPSemrockGFP-4050B-000

466/40x [446-486]

495LP

525/50m [500-550]Nikon ID 96372
3Cy5Semrock

Cy5-5070A

617/55x [590-645]652LP697/77m [659-736]Nikon ID 96376
4

DAPI/GFP/Cy3/Cy5

Semrock

C182279

None

409/493/573/652432/515/595/68177074160 Custom Quad C182279.
Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor SpectraX 
5

DIC Analyzer

NikonTi2-C-DICACLNot ApplicableNot ApplicableNot ApplicableRequis pour l'imagerie DIC
6

CFP\YFP\mCherry

SemrockC1997767None459/526/596

475/543/702

Les filtres d'excitation sont inclus dans la source lumineuse Lumencor SpectraX 
  • Détecteur
    • Hamamatsu ORCA Flash V2 C11440-22CU CMOS Monochrome 2048 x 2048 pixels, 16-bit, 30 i/s at


  1. Allumez l’ordinateur (#1)
  2. Allumez la multiprise d’alimentation du microscope (#2)

  3. Si l'incubation est nécessaire, allumez le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et ouvrez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D)

    Assurez-vous que le bain et l'humidificateur soient proprement remplis avec de l'eau distillée

  4. Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows

  5. Démarrez le logiciel NIS-Elements

Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope. Pour cela suivre les instructions Paramétrage du logiciel.

  1. Enregistrez vos données
  2. Fermez le logiciel NIS-Elements
  3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
  4. Éteindre l'ordinateur
  5. Récupérer vos échantillons
  6. Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
  7. Si l'incubation a été utilisée, éteindre le module d'incubation Okolab (#3A) et le bain-marie (#3B) et fermez les bonbonnes de CO2 (#3C) et d'azote N2 (#3D)
  8. Éteindre la multiprise d’alimentation du microscope (#2)
  9. Couvrir l’instrument avec la housse de protection

Rappels Importants

  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre
  • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
  • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
  • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. A l’intérieur créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. 

Attention, cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres originaux du logiciel.

  1. Si ouvert, fermez le logiciel NIS-Elements et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
  2. Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares
  3. Ouvrez le logiciel NIS Settings Utility
  4. Cliquez sur l’onglet Import
  5. Cliquez sur Browse
  6. Naviguez jusqu’à votre bureau
  7. Sélectionnez le fichier Nikon-Ti2 Settings.bin
  8. Cliquez Open
  9. Sélectionnez tous les items
  10. Cliquez Import
  11. Cliquez OK
  12. Fermez le logiciel NIS Settings Utility
  13. Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel NIS-Elements


Les schémas suivant permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, contraste de phase) et en lumière réfléchie (fluorescence).

Schémas des trajets lumineux (anglais pdf)


Section disponible dans la version anglaise.


Section disponible dans la version anglaise.


Dépannage

Cela peut survenir lorsque l'humidificateur est trop rempli.

  • Éteindre le module d'incubation Okolab et le bain-marie
  • Enlever votre échantillon et le mettre de coté
  • Sécher la chambre d'incubation avec un tissu
  • Enlever délicatement le bouchon de l'humidificateur

Redoublez de précautions lorsque vous manipulez l'humidificateur. Il est en verre et fragile.

  • Retirer du liquide de l'humidificateur

L'humidificateur doit être rempli au maximum au 2/3

  • Fermez l'humidificateur en mettant le bouchon
  • Rallumez le module d'incubation Okolab et le bain-marie
  • Remettre votre échantillon

FAQ

Oui. C'est un microscope inversé conçu pour l'observation de specimen en culture (petri ou multi-puits).
Les objectifs sont optimisés pour l'imagerie de plaques multi-puits à fond de verre,
Il est aussi possible d'imager des specimen montés entre lame et lamelle d'épaisseur 0.17mm.
Pour l'imagerie longue durée il faut être vigilant aux effets de la photo-toxicité.

Plus de dépannage et de FAQ sont disponibles dans la version anglaise

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