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Microscope à haut débit GE InCell Analyzer 6000

Pavillon JA Bombardier, Local 3129
Instrument octroyé au Dr Steve Michnick par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)

  • Applications
    • Lumière transmise
    • Pseudo contraste de phase et DIC
    • Fluorescence
    • Imagerie à haut débit
    • Imagerie longue durée

  • Sources lumineuses

    • LED pour la lumière transmise

    • Toptica iChrome MLE pour la fluorescence

Source lumineusePolychroïqueLongueurs d'onde d'excitationFluorophores compatiblesPuissance nominale
(mW)
405nm390/40[370-410]DAPI, Hoechst50
488nm

482/18

[473-491]FITC, GFP, YFP

25

561nm

564/9

[559-569]

Cy3, DsRed, TxRed

30
642nm640/14[632-647]

Cy5, Cy5.5

50

  • Objectifs

    1. 10x/0.45 Air WD 4.0
    2. 20x/0.75 Air WD 1.0
    3. 40x/0.6 Air WD 2.7-3.7
    4. 60x/0.95 Air WD 0.15
PositionNomMarqueNom completIdentifiantGrossissementOuverture numériqueImmersionTypeDistance de travail (mm)Transmittance
(% [nm])		TechniqueÉpaisseur du couvre-objet (mm)
110x/0.45 AirNikon

10x/0.45 Air
Plan Apo
M25x0.75

MRD0010120x0.5AirPlan Fluor4.0>80% [TBD-TBD]BF, p-PhC, p-DIC, Fluo0.17
2

20x/0.75 Air

Nikon20x/0.75 Air
Plan Apo
DIC N2
M25x0.75		MRD0020160x

1.4

Air
Plan Apo1.0>80% [TBD-TBD]BF, p-PhC, p-DIC, Fluo0.17
3

40x/0.6 Air

Nikon40x/0.6 Air
Plan Fluor ELWD
M25x0.75		MRH08430

100x

1.45
Air
Plan Fluor2.7-3.7>80% [TBD-TBD]BF, p-PhC, p-DIC, Fluo0.17
460x/0.95 Air Nikon60x/0.95 Air 
Plan Apo
M25x0.75		MRD00600

100x

1.45

Air
Plan Apo0.15>80% [TBD-TBD]BBF, p-PhC, p-DIC, Fluo0.17

BF: Champ clair (Bright-field)
p-PhC: Pseudo-contraste de phase
p-DIC: Pseudo-contraste d'interférence différentiel

  • Cubes de filtres

    1. DAPI

    2. GFP

    3. Cy3

    4. Cy5

    5. Cy5.5
PositionNomMarqueIdentifiant

Miroir polychroïque

(Transmission)

Filtre d'émissionBande passante effective
1DAPITBDTBDBP 420/20
[430-462]		455/50
[430-480]		[430-480]
2GFPTBDTBD

BP 446/32; 524/42; 600/36; 732/137

525/20
[515-535]		[515-535]
3Cy3TBD

TBD

BP 446/32; 524/42; 600/36; 732/137605/52
[579-631]		[582-618]
4

Cy5

TBD

TBD

BP 446/32; 524/42; 600/36; 732/137707/72
[671-743]		[671-743]
5

Cy5.5

TBDTBDBP 446/32; 524/42; 600/36; 732/137720/60
[690-750]		[690-750]
  • Détecteur
    • sCMOS Monochrome 2560 x 2160 pixels, 16-bit, pixel 6.5um x6.5um, capteur 16.6mm x 14.0mm


  1. Si nécessaire, allumez le du microscope (#1)

    Note

    L’interrupteur n’est pas facilement accessible et se trouve à l’arrière du côté droit de l’appareil

  2. Si nécessaire, allumez l’ordinateur (#2)
  3. Utilisez vos identifiants UdeM pour vous connecter à Windows

  4. Démarrez le logiciel IN Cell Analyzer 6000

Dans le logiciel IN Cell Analyzer:

  1. Cliquez sur Eject pour ouvrir la porte d'accès
  2. Insérer votre échantillon dans l'espace prévu à cet effet en respectant l'orientation indiquée

  3. Cliquez sur Load pour fermer la porte d'accès

    Important

    Pour une utilisation avec l'objectif 60x il est absoluement nécessaire d'utiliser une plaque multi-puit avec un fond de verre. L'épaisseur de verre doit être de 0.17mm. Nous recommandons les plaques suivantes:

    • Greiner SensoPlate Plus 96-well 655891
    • Nunc Optical CVG 96-well 164588
  1. Enregistrez vos données
  2. Fermez le logiciel In Cell Analyzer
  3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
  4. Récuppérez vos échantillons
  5. Cliquez sur Load pour refermer la porte d'accès
  6. Éteindre l'ordinateur

Rappels Importants

  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre
  • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
  • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
  • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. A l’intérieur créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

Important

Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

Lors de la première utilisation, il est nécessaire de créer et définir le type de plaque utilisée.

Dans le logiciel IN Cell Analyzer:

  1. Sélectionnez dans le menu Application>Plate\Slide Manager...
  2. Sélectionnez New Plate\Slide
  3. Sélectionnez le numéro de puits de votre plaque (6, 24, 96 etc...)
  4. Ajustez les paramètres suivants:
    1. Nom: Votre-Nom_Votre-plaque
    2. Hauteur de plaque, épaisseur du fond et volume du puit (Plate height, Bottom Thickness, well volume) habituellement fournis par le manufacturier
    3. Le matériau utilisé plastique ou verre (Plastic or Glass)
    4. Si nécessaire ajustez le nombre de lignes et de colonnes ainsi que la forme du puit (rond ou rectangulaire)
  5. Cliquez sur OK
  6. Fermez la fenetre du Plate/Slide Manager


Mesurer la hauteur de plaque et l'épaisseur du fond de plaque

  1. Naviguez sur le Dashboard et sélectionnez Objective Lens
  2. Selectionnez l'objectif 10x
  3. Sur le plan de la plaque cliquez sur le centre d'un puit contenant un échantillon pour centrer ce puit sur l'objectif
  4. Sur le Dashboard  sous Plate/Slide cliquez sur Verify LAF
  5. Si 2 pics sont détéctés (lignes verticales bleues) en accord avec les pics de mesurés (courbe noire), cliquez sur Apply Measured Parameters
  6. Cliquez sur OK
  7. Cliquez sur Yes
  8. Si les 2 pics ne sont pas correctement détectés, modifiez le bottom thickness et répétez l'opération.
  9. Fermez la fenêtre Laser Autofocus Plate/Slide Verification


L'écart de A1 (Offset) et la distance interpuit peuvent être mesurés

Écart du puit A1 (Offset)

Dans le logiciel In Cell Analyzer:

  1. Naviguez sur le Dashboard et sélectionnez Objective Lens
  2. Selectionnez l'objectif 10x
  3. Cliquez sur le bouton + pour ajouter un channel brightfield
  4. Sur le plan de la plaque, cliquez sur le centre du puit A1 pour centrer ce puit sur l'objectif
  5. Cliquez sur le bouton Setup Preview Imaging
  6. Dessiner un rectangle autour du puit A1
  7. Cliquez sur preview (sur le panneau d'acquisition en haut à droite de l'écran)
  8. Attendre que la prévisualisation soit générée
  9. Sur le plan de la plaque, cliquez sur le centre du puit A1 pour centrer ce puit sur l'objectif

  10. Dans le dashboard sélectionnez Plate/Slide et cliquez sur Edit Plate puis sur Define Upper Left Well

  11. Cliquez sur Yes

  12. Cliquez sur Yes

Distance inter-puit (Offset)

  • Répétez les étapes 1 à 11 pour le puit en bas à droite

Vérification

  • Générez une prévisualisation des puits en haut à gauche et en bas à droite afin de vérifier qu'ils sont biens alignés avec le plan de la plaque

  • Sauvegardez votre plaque  


Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair) et en lumière réfléchie (fluorescence).




Section disponible dans la version anglaise.



Section disponible dans la version anglaise.


Le microscope n'affiche pas la lumière verte habituelle, que faire?

  • Habituellement, ce microscope affiche une lumière verte lorsqu'il est opérationel et une lumière orange lorsqu'il est en cours d'utilisation.
  • Une lumière rouge est allumée signifie que le microscope n'est pas fonctionnel. Dans ce cas veuillez contacter le responsable de la plateforme.

Puis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture?

  • Non. Ce microscope est conçu pour l'acquisition à haut-débit de spécimen en plaques multi-puits.
  • Vous pouvez également faire l'acquisition d'images de specimen entre lame et lamelle (épaisseur 0.17mm)


Comment éteindre le microscope?

Habituellement le microscope reste allumé. Cependant, il est préférable de l'éteindre en cas de non-utilisation prolongée. Pour ce faire

  1. Naviguez dans Application> Hardware>
  2. Cliquez sur Shutdown Instrument
  3. Attendre que le microscope s'éteigne

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