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Microscope confocal à disque rotatif Zeiss Axio-Observer Z1

Pavillon J-A Bombardier, Local 3223-1
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 2

Instrument octroyé au Dr Daniel Zenklusen par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)

  • Applications
    • Lumière transmise
    • Fluorescence
    • Imagerie du vivant

  • Sources lumineuses

    • Lampe LED pour la lumière transmise

    • Lumencor SOLA pour la fluorescence visible
    • Lasers (405/488/561/631) pour la fluorescence

      Laser (nm)Puissance nominale (mW)Puissance à l'objectif 10x
      405

      488

      561

      631

  • Objectifs
  1. 10x/0. Air WD

    PositionNomMarqueNom completIdentifiantGrossissementOuverture numériqueImmersionTypeDistance de travail (mm)Transmittance
    (% [nm])    		TechniqueÉpaisseur du couvre-objet (mm)
    110x/0 AirZeiss








    		0.17

    BF : Champ clair (Bright-field)
    PhC : Contraste de phase


  • Cubes de filtres
    1. DAPI

      PositionNomMarqueIdentifiantFiltre d'excitation Miroir dichroïqueFiltre d'émissionCommentaires
      1DAPI
      Filter Set 49      		Zeiss

      488049-9901

      		365/50
      [325-375]      		395LP445/50
      [420-470]


  1. Allumez l’ordinateur (#1)
  2. Si nécessaire, allumez la multiprise d’alimentation du module d'incubation
  3. Allumez la multiprise d’alimentation des cameras (#2), à gauche du microscope sur le module des lasers
  4. Allumez la multiprise d’alimentation du microscope (#3), à droite du microscope

  5. Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows

    Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope AVANT de démarrer le logiciel. Pour ce faire, suivre les instructions Première Utilisation.

  6. Démarrez le logiciel Zen Blue

Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. 

Attention, cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres originaux du logiciel.

  1. Si ouvert, fermez le logiciel Zen Blue et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
  2. Sur le Bureau ouvrez le dossier Documentation
  3. Double-cliquez sur Settings for Axio-Observer Z1
  4. Un script s'excutera et une fenêtre noire apparaitra brièvement
  5. Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel Zen Blue

Cette procédure permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure le microscope sera prêt pour l'acquisition.

Sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
  2. Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
  3. Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile
  4. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives>10x pour sélectionner l'objectif 10x
  5. Si demandé, appuyez sur Done pour supprimer l'avertissement de nettoyage de l'objectif à huile
  6. Appuyez sur Home>Microscope>XYZ>Position>Z-Position>Set zero>Auto pour effectuer la calibration de la mise au point
  7. Appuyez sur OK pour lancer la procédure de calibration de la mise au point
  8. Attendre quelques secondes que la calibration soit terminée

Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z = 5 mm). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position

Faire d’abord la calibration de la mise au point avant d'effectuer la première mise au point.

Sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 10x pour sélectionner l'objectif 10x

    L’objectif 10x est le plus sécuritaire car il possède une grande distance de travail (6.5 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec un objectif sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.

  3. Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
  4. Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
  5. Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile

  6. Placez la lame de test sur la platine du microscope avec le couvre-objet vers l'objectif

    Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point.

  7. Si nécessaire, déplacez la platine pour que l'échantillon soit centré sur l'objectif

Sur l’ordinateur :

  1. Ouvrez le logiciel Zen Blue

  2. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (CFP/GFP/DsRed ou GFP/RFP/Cy5, etc…) pour activer la configuration

  3. Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette

    Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z = 5 mm). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position

  4. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination

Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.

Ce microscope ne possède pas d'autres objectifs à air que le 10x. Cependant s'il en avait la procédure serait la suivante::

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur l'objectif désiré

Dans le logiciel Zen Blue :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (CFP/GFP/DsRed ou GFP/RFP/Cy5, etc…) pour activer la configuration
  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
  4. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Control>Objectives

  2. Appuyez sur l'objectif désiré 63x ou 100x. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.

    L’objectif 63x est le meilleur objectif à huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.

     

  3. Retirez votre échantillon
  4. Déposer une goutte d’huile sur l'objectif
  5. Replacez votre échantillon
  6. Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.

Dans le logiciel Zen Blue :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (CFP/GFP/DsRed ou GFP/RFP/Cy5, etc…) pour activer la configuration
  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
  4. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
  • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
  • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
  • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

  1. Enregistrez vos données
  2. Fermez le logiciel Zen Blue
  3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
  4. Si utilisée, éteindre la multiprise d’alimentation du module d'incubation 
  5. Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
  6. Éteindre la barre d’alimentation du microscope (#3)
  7. Éteindre la barre d’alimentation des cameras (#2)
  8. Éteindre l'ordinateur

Rappels Importants

  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre
Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, contraste de phase) et en lumière réfléchie (fluorescence).
Section disponible dans la version anglaise.


Section disponible dans la version anglaise.

Dépannage

Le spinning disk est un confocal multipoints. En dehors du plan focal l'échantillon disparait complètement. Il est donc plus facile de trouver son échantillon aux occulaires. Suivre la procédure de mise au point pour y parvenir.

FAQ

Oui. C'est un microscope inversé conçu pour l'observation de spécimen vivant. Le spining disk est particulièrement apprécié pour sa phototoxicité limitée.

Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.

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