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| expanded | true |
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| title | Démarrage |
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| - Si ce n’est pas déjà fait, allumer l’ordinateur et se connecter à Windows avec les identifiants UdeM
- Retirer la housse anti-poussière du microscope
- Activer les commutateurs System (#2) et Components (#3) dans le rack sous le microscope
- Activer la clé du laser (#4) dans le rack sous le microscope
- Lors de la première utilisation, importer la configuration du microscope dans le logiciel (voir section Première Utilisation)
- Lancer Zen
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| title | Première utilisation |
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| Lors de la première utilisation de l’instrument, il est nécessaire d’importer la configuration du microscope dans le logiciel. Cette procédure est généralement effectuée pendant la séance de formation. Cependant, elle peut aussi être utilisée pour réinitialiser le logiciel s’il ne s’affiche pas correctement, par exemple. L’exécution de cette procédure effacera tous vos protocoles expérimentaux et réinitialisera le logiciel à ses paramètres d’origine (demandez du soutien si vous n’êtes pas certain). Si Zen est ouvert, fermez-le et attendez qu’il soit complètement arrêté (cela peut prendre jusqu’à 30 secondes) Sur le Bureau, ouvrez le dossier Softwares Double-cliquez sur Zen Settings for LSM 900 Un script s’exécutera et une fenêtre noire apparaîtra brièvement Lorsque le message Settings for Zen have been imported successfully apparaît, cliquez sur OK pour le fermer Vous pouvez maintenant ouvrir Zen
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| title | Chargement des échantillons |
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| Lors de cette procédure, vous allez : Mettre le microscope dans une configuration sécurisée Effectuer une calibration Charger votre échantillon Localiser et ajuster la mise au point
Une fois cette procédure terminée, votre échantillon sera prêt pour l’acquisition. | UI Expand |
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| Cette étape est nécessaire pour calibrer le microscope en XY et Z. Effectuer cette calibration réduira considérablement le temps nécessaire pour localiser et mettre au point votre échantillon. Si ce n’est pas déjà fait, sélectionnez l’objectif de plus faible grossissement. Sur l’écran tactile du microscope : Home > Microscope > Control > Objectives > 5x. Dans Zen, une fois lancé, une boîte de dialogue de calibration devrait apparaître. Cliquez simplement sur Calibrate Now. Le microscope abaissera les objectifs, effectuera d’abord une calibration XY, puis une calibration Z, et reviendra ensuite à sa position d’origine.
| Tip |
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Une fois calibré, la mise au point se trouve généralement à Z = 1,7 mm pour une lame de microscope.
La position Z peut être visualisée sur l’écran tactile du microscope sous Home > Z-Position, ainsi que dans Zen, dans l’onglet Focus situé sur le côté droit de l’écran. |
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| title | La boîte de dialogue de calibration n’est pas apparue... |
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| title | Vérification si le système est déjà calibré |
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| Le système peut déjà être calibré. Cela peut se produire si un utilisateur précédent a calibré le système et l’a laissé allumé. Dans Zen, dans l’onglet Focus situé sur le côté droit de l’écran : Cliquez sur Load pour abaisser l’objectif La position Z est indiquée sous Current Si la valeur de la position Z est inférieure à 100 µm, le système est calibré
Sur l’écran tactile du microscope : Abaissez l’objectif en appuyant sur Home > Load Position Appuyez sur Set Work Position pour enregistrer cette position Si nécessaire, ajustez légèrement la mise au point vers le haut pour effacer le message Lower Z Limit Reached affiché sur l’écran tactile La valeur de la position Z est indiquée Si la valeur est inférieure à 0,1 mm, le système est calibré
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| UI Expand |
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| title | Calibration manuelle avec le logiciel |
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| Dans Zen, dans l’onglet Stage situé sur le côté droit de l’écran : Si ce n’est pas déjà fait, cochez l’option Show All En bas de l’onglet, cliquez sur Calibrate Un message d’avertissement apparaîtra ; cliquez sur Continue Le microscope abaissera les objectifs et effectuera une calibration de la platine XY, puis reviendra à sa position d’origine
Dans Zen, dans l’onglet Focus situé sur le côté droit de l’écran : Si ce n’est pas déjà fait, cochez l’option Show All En bas de l’onglet, cliquez sur Calibrate Un message d’avertissement apparaîtra ; cliquez sur Continue Le microscope effectuera alors une calibration Z, puis reviendra à sa position d’origine
Les calibrations XY et Z sont maintenant terminées. |
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| title | Calibration manuelle avec l’écran tactile du microscope |
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| Sur l’écran tactile du microscope : Naviguez vers Home > Microscope > XYZ > Position > Z-Position > Set Zero > Auto pour effectuer la calibration de la mise au point Appuyez sur OK pour démarrer la procédure de calibration Attendez quelques secondes que la calibration soit terminée Abaissez l’objectif en appuyant sur Home > Load Position Appuyez sur Set Work Position pour enregistrer cette position Si nécessaire, ajustez légèrement la mise au point vers le haut pour effacer le message Lower Z Limit Reached affiché sur l’écran tactile Naviguez vers Home > Microscope > XYZ > Position > XY-Position > Set Zero > Auto pour effectuer une calibration de la platine Appuyez sur OK pour démarrer la procédure de calibration Attendez quelques secondes que la calibration soit terminée
Les calibrations XY et Z sont maintenant terminées. |
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| title | S’assurer que la boîte de dialogue de calibration s’affiche au démarrage |
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| Dans Zen : Dans la barre de menu, naviguez vers Tools > Options Sélectionnez Startup/Shutdown Sous Stage/Focus Calibration, assurez-vous que Request Stage/Focus Calibration on Startup est coché Cliquez sur OK pour fermer la boîte de dialogue Options
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| title | Mise au point initiale |
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| | Warning |
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Assurez-vous que la calibration a été effectuée au préalable. La calibration réduira considérablement le temps nécessaire pour localiser et mettre au point votre échantillon. |
Sur l’écran tactile du microscope : - Si ce n’est pas déjà fait, sélectionnez l’objectif de plus faible grossissement : Home > Microscope > Control > Objectives > 5x
| Info |
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| L’objectif 5× est le plus sûr à utiliser en raison de sa longue distance de travail (12 mm). L’échantillon apparaîtra parfaitement net bien avant que l’objectif ne s’en approche. Il est recommandé de toujours faire la mise au point en utilisant d’abord les objectifs les plus sûrs. Comme les objectifs sont parafocaux, faire la mise au point avec les objectifs les plus sûrs facilitera la localisation de l’échantillon lors du passage à des objectifs de plus fort grossissement. |
Abaissez l’objectif en appuyant sur Home > Load Position Appuyez sur Set Work Position pour enregistrer cette position Si nécessaire, ajustez légèrement la mise au point vers le haut pour effacer le message Lower Z Limit Reached affiché sur l’écran tactile Placez la lame test sur la platine du microscope avec le couvre‑objet tourné vers l’objectif | Note |
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L’utilisation d’une lame test réduira considérablement le temps nécessaire pour préparer l’instrument. |
- Si nécessaire, ajustez la platine pour vous assurer que l’échantillon est centré sous l’objectif
Dans Zen : Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (DAPI, GFP ou mPlum) pour activer la configuration Ajustez la mise au point avec la molette principale en regardant à travers les oculaires jusqu’à ce que l’image soit parfaitement nette - Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l’illumination
| Tip |
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Une fois calibré, la mise au point se trouve généralement à Z = 1,7 mm pour une lame de microscope.
La position Z peut être visualisée sur l’écran tactile du microscope sous Home > Z-Position, ainsi que dans Zen, dans l’onglet Focus situé sur le côté droit de l’écran. |
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| title | Mise au point secondaire |
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| | Warning |
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Faire d’abord la mise au point initiale avec l'objectif le plus sécuritaire avant de passer à des objectifs de plus fort grossissement. |
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| title | Mise au point avec les objectifs à air |
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| Après avoir effectué la mise au point initiale, sur l’écran tactile du microscope : Appuyez sur Home > Microscope > Control > Objectives Appuyez sur 10x, 20x, 40x (0.95) pour sélectionner l’objectif désiré
| Info |
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L’objectif 40× (0,95) Air est le meilleur objectif à air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0,95), mais il offre un champ de vision plus petit.
L’objectif 20× (0,8) offre le meilleur compromis entre résolution et champ de vision. |
| Warning |
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Il y a deux (2) objectifs 40×, assurez-vous de sélectionner l’objectif 40× Air (0,95). |
Dans Zen : Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (DAPI, GFP ou mPlum) pour activer la configuration Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant à travers les oculaires jusqu’à ce que l’image soit parfaitement nette Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l’illumination
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition ! |
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