- Created by Nicolas Stifani, last modified by Emmanuel Bajon on Jul 12, 2024
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Microscope droit Zeiss Axio-Imager Z2
Pavillon J-A Bombardier, Local 3223-0
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 1
Instrument octroyé au Dr Pascal Chartrand par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)
Applications
Lumière transmise
Contraste d'interférecence (DIC)
Fluorescence
Sources lumineuses
Lampe halogène 12V 100W pour la lumière transmise
Lampe X-Cite exacte 200 W (340~675nm) pour la fluorescence
Cube de filtres
Puissance mesurée en mW
2024/07/03
38 HE GFP
68.6 @480nm
43 HE DsRed
118 @550nm
45 TxRed
174.9 @570nm
46 HE YFP
31 @500nm
49 DAPI
41 @380nm
50 Cy5
42.9 @640nm
Cy3.5n (SP103)
56.8 @570nm
Cy3n (SP102)
63.5 @550nm
Guide de démarrage rapide X-Cite exacte (anglais pdf)
Guide d'utilisation X-Cite exacte (anglais pdf)
Comparaison entre les spectres d'émission de lampe au mercure HBO vs X-Cite exacte (anglais) (Source)
Objectifs
10x/0.30 Air WD 5.30
20x/0.80 Air WD 0.61
40x/0.75 Air WD 0.71
63x/1.40 Huile WD 0.19
100x/1.30 Huile WD 0.20
100x/1.40 Huile WD 0.17
Position
Nom
Marque
Nom complet
Identifiant
Grossissement
Ouverture numérique
Immersion
Type
Distance de travail (mm)
Transmittance
(% [nm])
Technique
Épaisseur du couvre-objet (mm)
1
10x/0.30
AirZeiss
10x/0.3 DIC I
EC Plan-Neo Fluar
M27
10x
0.3
Air
Plan Neofluar
5.2
BF, DIC, Fluo
0.17
2
20x/0.80
AirZeiss
20x/0.8 DIC II
Plan-Apochromat
W0.8x1/36"20x
0.8
Air
Plan Apochromat
0.55
BF, DIC, Fluo
0.17
3
40x/0.75
AirZeiss
40x/0.75 DIC II
EC Plan-Neofluar
M2740x
0.75
Air
Plan Neofluar
0.71
BF, DIC, Fluo
0.17
4
63x/1.40
Huile
Zeiss
63x/1.4 DIC III
Plan-Apochromat
M27
63x
1.4
HuilePlan Apochromat
0.19
BF, DIC, Fluo
0.17
5
100x/1.30
HuileZeiss
100x/1.3 DIC III
EC Plan-Neofluar
M27100x
1.3
HuilePlan Neofluar
0.20
BF, DIC, Fluo
0.17
6
100x/1.40
HuileZeiss
100x/1.4 DIC III
Plan-Apochromat
M27100x
1.4
HuilePlan Apochromat
0.17
BF, DIC, Fluo
0.17
BF : Champ clair (Bright-field)
DIC: Contraste d'interférence
Cubes de filtres
DAPI
GFP
YFP
DsRed/Cy3
TxRed
Cy3.0
Cy3.5
Cy5
Analyseur DIC
Vide
Position
Nom
Marque
Identifiant
Filtre d'excitation
Miroir dichroïque
Filtre d'émission
Commentaire
1
DAPI
Zeiss
365/50
[340-390]
395LP
445/50
[420-470]
2
GFP
Zeiss
470/40
[450-490]495LP
525/50
[500-550]
FT 495
BP 525/50
3
YFP
Zeiss
500/20
[490-510]
515LP
535/30
[520-550]
4
DsRed
Zeiss
545/25
[533-557]
570LP
605/70
[570-640]
FT 570
BP 605/70
5
TxRed
Zeiss
560/40
[540-580]
585LP
630/75
[593-667]
6
Cy3.0
Chroma
546/11
[541-551][560-574]
7
Cy3.5
Chroma
581/10
[576-586][597-637]
8
Cy5 narrow
Chroma
640/30
[625-655][665-715]
9
Analyseur DIC
Zeiss
10
Vide
- Détecteur
- Caméra monochrome sCMOS Photometrics Prime 2048 x 2048 pixels, 16-bit, 30 images/s à pleine résolution, 72% QE at 550nm
Prime-Datasheet.pdf
Prime-Manual.pdf
- Caméra monochrome sCMOS Photometrics Prime 2048 x 2048 pixels, 16-bit, 30 images/s à pleine résolution, 72% QE at 550nm
Retirez la housse de protection du microscope
Allumez l'ordinateur (#1)
Allumez la lampe X-Cite exacte sur l'étagère à gauche du microscope (#2)
L'affichage de la lampe X-Cite exacte clignotera pendant le chauffage (4 minutes environ) et sera ensuite opérationelle.
La lampe X-Cite exacte doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa
Allumez la barre d'alimentation sur l'étagère au dessus de l'ordinateur (#3)
Appuyez sur le bouton de démarrage du microscope situé à l'arrière gauche (#4)
Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows
Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope AVANT de démarrer le logiciel. Pour ce faire, suivre les instructions Première Utilisation.
Démarrez le logiciel Zen Blue
Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple.
Attention, cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres originaux du logiciel.
Si ouvert, fermez le logiciel Zen Blue et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
Sur le Bureau ouvrez le dossier Documentation
Double-cliquez sur Settings for Axio-Imager Z2
Un script s'excutera et une fenêtre noire apparaitra brièvement
Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel Zen Blue
Cette procédure permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure le microscope sera prêt pour l'acquisition.
Sur l’écran tactile du microscope :
Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile
Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives>10x pour sélectionner l'objectif 10x
Si demandé, appuyez sur Done pour supprimer l'avertissement de nettoyage de l'objectif à huile
Appuyez sur Home>Microscope>XYZ>Position>Z-Position>Set zero>Auto pour effectuer la calibration de la mise au point
Appuyez sur OK pour lancer la procédure de calibration de la mise au point
Attendre quelques secondes que la calibration soit terminée
Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z = 11 mm). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position
Important
Faire d’abord la calibration de la mise au point avant d'effectuer la première mise au point.
Sur l’écran tactile du microscope :
Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives
Appuyez sur 10x pour sélectionner l'objectif 10x
L’objectif 10x est le plus sécuritaire car il possède la plus grande distance de travail (5.3 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.
Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile
Placez la lame de test sur la platine du microscope avec le couvre-objet vers l'objectif
Important
Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point.
Si nécessaire, déplacez la platine pour que l'échantillon soit centré sur l'objectif
Sur l’ordinateur :
Ouvrez le logiciel Zen Blue
Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration
Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z = 11 mm). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position
Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Important
Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.
Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :
Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives
Appuyez sur 20x ou 40x pour sélectionner l'objectif désiré
L’objectif 20x est le meilleur objectif à Air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0.8). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.
Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :
Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives
Appuyez sur 63x Oil, 100x Oil (1.4) ou 100x Oil (1.4) pour sélectionner l'objectif désiré. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.
L'objectif 63x est le meilleur objectif à l'huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 240nm à une longueur d'onde de 550nm.
Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon
Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.
Dans le logiciel Zen Blue :
Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration
Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).
Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:
Enregistrez vos données
Fermez le logiciel Zen Blue
Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
Éteindre la barre d'alimentation sur l'étagère au dessus de l'ordinateur (#3)
Éteindre la lampe X-Cite exacte (#2)
La lampe X-Cite exacte doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa
Éteindre l'ordinateur
Couvrir l’instrument avec la housse de protection
Rappels Importants
Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
Laissez le microscope et l’espace de travail propre
Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, DIC) et en lumière réfléchie (fluorescence).
Manuels disponibles version anglaise.
Section disponible dans la version anglaise.
Section disponible dans la version anglaise.
Dépannage
Le meilleur moyen de résoudre un problème en Microscopie est de suivre le trajet lumineux. Vous trouverez dans l'onglet Trajet lumineux de cette page, les schémas qui vous permettront de suivre la lumière tout le long de son chemin au travers du microscope.
Ouvrez le fichier du trajet lumineux
En partant de la source lumineuse et en se dirigeant vers le détecteur, vérifiez qu'il y a effectivement de la lumière après chaque composant du microscope
FAQ
Non. C'est un microscope droit conçu pour l'observation de spécimen entre lame et lamelles (d'épaisseur 0.17mm).
Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.
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