- Created by Nicolas Stifani, last modified on Jul 05, 2022
Microscope droit Zeiss Axio-Imager Z2
Pavillon Roger Gaudry, Local B-301-1
Accès sur demande auprès de la responsable de la Plateforme de microscopie du département de Biochimie et Médecine Moléculaire.
Consultez les
et la
de la Plateforme de Microscopie du département de Biochimie et Médecine Moléculaire.
- Applications
- Lumière transmise
- Contraste d'interférecence (DIC)
- Fluorescence
Sources lumineuses
Lampe halogène 12V 100W pour la lumière transmise
Lampe X-Cite exacte 200 W (340~675nm) pour la fluorescence
Caractéristiques complètes de la lampe X-Cite exactePic d'émission (nm) Puissance (mW) 334 5 365 20 405 19 436 22 546 21 579 18 Guide de démarrage rapide X-Cite exacte (anglais pdf)
Guide d'utilisation X-Cite exacte (anglais pdf)
Comparaison entre les spectres d'émission de lampe au mercure HBO vs X-Cite exacte (anglais) (Source)
Objectifs
10x/0.30 Air WD 5.30
20x/0.80 Air WD 0.61
- 40x/0.75 Air WD 0.71
63x/1.40 Huile WD 0.19
- 100x/1.30 Huile WD 0.20
100x/1.40 Huile WD 0.17
Caractéristiques complètes des objectifsPosition Nom Marque Nom complet Identifiant Grossissement Ouverture numérique Immersion Type Distance de travail (mm) Transmittance
(% [nm])Technique Épaisseur du couvre-objet (mm) 1 10x/0.30
AirZeiss 10x/0.3 DIC I
EC Plan-Neo Fluar
M27420340-9901-000 10x 0.3 Air Plan Neofluar 5.2 >90% [480-780] BF, DIC, Fluo 0.17 2 20x/0.80
AirZeiss 20x/0.8 DIC II
Plan-Apochromat
W0.8x1/36"440640-9903-000 20x 0.8
Air
Plan Apochromat 0.55 >90% [410-800] BF, DIC, Fluo 0.17 3 40x/0.75
AirZeiss 40x/0.75 DIC II
EC Plan-Neofluar
M27420360-9900-000 40x
0.75 Air
Plan Neofluar 0.71 >90% [410-780] BF, DIC, Fluo 0.17
4 63x/1.40
HuileZeiss 63x/1.4 DIC III
Plan-Apochromat
M27420782-9900-000 63x
1.4
HuilePlan Apochromat 0.19 >80% [440-710] BF, DIC, Fluo 0.17 5 100x/1.30
HuileZeiss 100x/1.3 DIC III
EC Plan-Neofluar
M27420490-9900-000 100x 1.3 HuilePlan Neofluar 0.20 >80% [400-820] BF, DIC, Fluo 0.17 6 100x/1.40
HuileZeiss 100x/1.4 DIC III
Plan-Apochromat
M27420792-9900-000 100x 1.4 HuilePlan Apochromat 0.17
>80% [400-820] BF, DIC, Fluo 0.17 BF : Champ clair (Bright-field)
DIC: Contraste d'interférence
- Cubes de filtres
- DAPI
- GFP
- YFP
- DsRed
- TxRed
- Cy3.0
- Cy3.5
- Cy5
- Analyseur DIC
Vide
Caractéristiques complètes des filtresPosition Nom Marque Identifiant Filtre d'excitation Miroir dichroïque Filtre d'émission Commentaire 1 DAPI
Filter Set 49Zeiss 365/50
[340-390]395LP 445/50
[420-470]2 GFP
Filter Set 38Zeiss 000000-1031-346 470/40
[450-490]495LP
525/50
[500-550]FT 495 BP 525/50 3 YFP
Filter Set 46Zeiss 500/20
[490-510]515LP 535/30
[520-550]4 DsRed
Filter Set 43Zeiss 545/25
[533-557]570LP 605/70
[570-640]FT 570 BP 605/70 5 TxRed
Filter Set 45Zeiss 000000-1114-462 560/40
[540-580]585LP 630/75
[593-667]6 Cy3.0 Chroma 546/11
[541-551]557LP 567/15
[560-574]7 Cy3.5 Chroma SP103v1 581/10
[576-586]593LP 617/40
[597-637]8 Cy5 narrow Chroma 49009 640/30
[625-655]660LP 690/50
[665-715]9 Analyseur DIC Zeiss 10 Vide - Détecteur
- Caméra monochrome sCMOS Photometrics Prime 2048 x 2048 pixels, 16-bit, 30 images/s à pleine résolution
- Détecteur
Si la fluorescence est nécessaire, allumez la lampe X-Cite exacte (#1 à gauche du microscope)
L'affichage de la lampe X-Cite exacte clignotera pendant le chauffage (4 minutes environ) et sera ensuite opérationelle.
La lampe X-Cite exacte doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa
Allumez l'alimentation du microscope (#2 module Power Supply 232 à droite du microscope)
- Appuyez sur le bouton de démarrage du microscope situé à l'arrière gauche (#3)
- Allumez la caméra Prime (#4 sur le dessus de la caméra)
- Allumez l'ordinateur (#5)
- Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows
Démarrez le logiciel Zen Blue
Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope dans le logiciel. Pour ce faire, suivre les instructions Paramétrage du logiciel.
- Enregistrez vos données
- Fermez le logiciel Zen Blue
- Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
- Éteindre l'ordinateur
- Éteindre la caméra Prime (#4)
- Éteindre l’alimentation du microscope (#2)
Si la fluorescence a été utilisée, éteindre la lampe X-Cite exacte (#1)
La lampe X-Cite exacte doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa
- Couvrir l’instrument avec la housse de protection
Rappels Importants
- Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
- Laissez le microscope et l’espace de travail propre
- Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
- À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
- Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).
Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:
Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple.
Attention, cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres originaux du logiciel.
- Si ouvert, fermez le logiciel Zen Blue et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
- Sur le Bureau ouvrez le dossier Documentation
- Double-cliquez sur Zen Settings for Axio-Imager Z2
- Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel Zen Blue
Cette procédure permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure le microscope sera prêt pour l'acquisition.
Calibration
Sur l’écran tactile du microscope :
- Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
- Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
- Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile
- Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives>10x pour sélectionner l'objectif 10x
- Si demandé, appuyez sur Done pour supprimer l'avertissement de nettoyage de l'objectif à huile
- Appuyez sur Home>Microscope>XYZ>Position>Z-Position>Set zero>Auto pour effectuer la calibration de la mise au point
- Appuyez sur OK pour lancer la procédure de calibration de la mise au point
- Attendre quelques secondes que la calibration soit terminée
Première mise au point
Sur l’écran tactile du microscope :
- Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives
Appuyez sur 10x pour sélectionner l'objectif 10x
L’objectif 10x est le plus sécuritaire car il possède la plus grande distance de travail (5.3 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.
- Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
- Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
- Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile
- Placez votre échantillon sur la platine du microscope avec le couvre-objet vers l'objectif
Sur l’ordinateur :
Ouvrez le logiciel Zen Blue
Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope dans le logiciel. Pour ce faire, suivre les instructions Paramétrage du logiciel.
Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration
Assurez-vous que votre échantillon soit centré sous l'objectif et que la lumière soit bien visible aux oculaires avant de continuer.
Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z = 13 mm) La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Mise au point secondaire
Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.
Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :
Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives
Appuyez sur 20x ou 40x pour sélectionner l'objectif désiré
L’objectif 20x est le meilleur objectif à Air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0.8). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.
- Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :
Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives
Appuyez sur 63x Oil, 100x Oil (1.3) ou 100x Oil (1.4) pour sélectionner l'objectif désiré. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.
L'objectif 63x est le meilleur objectif à l'huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 240nm à une longueur d'onde de 550nm.
- Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon
- Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.
Dans le logiciel Zen Blue :
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration
- Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, DIC) et en lumière réfléchie (fluorescence).
Manuels disponibles version anglaise.
Section disponible dans la version anglaise.
Section disponible dans la version anglaise.
Dépannage
Le meilleur moyen de résoudre un problème en Microscopie est de suivre le trajet lumineux. Vous trouverez dans l'onglet Trajet lumineux de cette page, les schémas qui vous permettront de suivre la lumière tout le long de son chemin au travers du microscope.
- Ouvrez le fichier du trajet lumineux
- En partant de la source lumineuse et en se dirigeant vers le détecteur, vérifiez qu'il y a effectivement de la lumière après chaque composant du microscope
FAQ
Non. C'est un microscope droit conçu pour l'observation de spécimen entre lame et lamelles (d'épaisseur 0.17mm).
Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.