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Microscope droit Zeiss Axio-Imager Z2

Pavillon J-A Bombardier, Local 3223-0
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 1 

Instrument octroyé au Dr Pascal Chartrand par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)

Démarrage

  1. Retirez la housse de protection du microscope

  2. Allumez l'ordinateur (#1)

  3. Allumez la lampe X-Cite exacte sur l'étagère à gauche du microscope (#2)

    L'affichage de la lampe X-Cite exacte clignotera pendant le chauffage (4 minutes environ) et sera ensuite opérationelle.

    La lampe X-Cite exacte doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa

  4. Allumez la barre d'alimentation sur l'étagère au dessus de l'ordinateur (#3)

  5. Appuyez sur le bouton de démarrage du microscope situé à l'arrière gauche (#4)

  6. Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows

    Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope AVANT de démarrer le logiciel. Pour ce faire, suivre les instructions Première Utilisation.

  7. Démarrez le logiciel Zen Blue

Première Utilisation

Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. 

Attention, cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres originaux du logiciel.

  1. Si ouvert, fermez le logiciel Zen Blue et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)

  2. Sur le Bureau ouvrez le dossier Documentation

  3. Double-cliquez sur Settings for Axio-Imager Z2

  4. Un script s'excutera et une fenêtre noire apparaitra brièvement

  5. Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel Zen Blue

Chargement des échantillons

Cette procédure permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure le microscope sera prêt pour l'acquisition.

Calibration de la mise au point (Z)

Sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse

  2. Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position

  3. Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile

  4. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives>10x pour sélectionner l'objectif 10x

  5. Si demandé, appuyez sur Done pour supprimer l'avertissement de nettoyage de l'objectif à huile

  6. Appuyez sur Home>Microscope>XYZ>Position>Z-Position>Set zero>Auto pour effectuer la calibration de la mise au point

  7. Appuyez sur OK pour lancer la procédure de calibration de la mise au point

  8. Attendre quelques secondes que la calibration soit terminée

Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z = 11 mm). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position

Première mise au point

Important

Faire d’abord la calibration de la mise au point avant d'effectuer la première mise au point.

Sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 10x pour sélectionner l'objectif 10x

    L’objectif 10x est le plus sécuritaire car il possède la plus grande distance de travail (5.3 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.

  3. Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse

  4. Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position

  5. Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile

  6. Placez la lame de test sur la platine du microscope avec le couvre-objet vers l'objectif

    Important

    Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point.

     

  7. Si nécessaire, déplacez la platine pour que l'échantillon soit centré sur l'objectif

Sur l’ordinateur :

  1. Ouvrez le logiciel Zen Blue

  2. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration

  3. Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette

    Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z = 11 mm). La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position

  4. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination

Mise au point secondaire

Important

Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.

Mise au point avec les objectifs à air

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 20x ou 40x pour sélectionner l'objectif désiré

    L’objectif 20x est le meilleur objectif à Air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (0.8). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.

  3. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette

  4. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

Mise au point avec les objectifs à l'huile

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 63x Oil, 100x Oil (1.4) ou 100x Oil (1.4) pour sélectionner l'objectif désiré. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.

    L'objectif 63x est le meilleur objectif à l'huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 240nm à une longueur d'onde de 550nm.

  3. Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon

  4. Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.

Dans le logiciel Zen Blue :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (GFP, DsRed, DAPI, etc…) pour activer la configuration

  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette

  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination

  4. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

Gestion du stockage

  • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)

  • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:

  • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

Fermeture

  1. Enregistrez vos données

  2. Fermez le logiciel Zen Blue

  3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:

  4. Si utilisés, nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille

  5. Éteindre la barre d'alimentation sur l'étagère au dessus de l'ordinateur (#3)

  6. Éteindre la lampe X-Cite exacte (#2)

    La lampe X-Cite exacte doit être allumée pendant au moins 30 minutes avant d’être éteinte et vice-versa

  7. Éteindre l'ordinateur

  8. Couvrir l’instrument avec la housse de protection

Rappels Importants

  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope

  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre


Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, DIC) et en lumière réfléchie (fluorescence).


Section disponible dans la version anglaise.

Section disponible dans la version anglaise.

Dépannage

Je ne vois pas de fluorescence !

Le meilleur moyen de résoudre un problème en Microscopie est de suivre le trajet lumineux. Vous trouverez dans l'onglet Trajet lumineux de cette page, les schémas qui vous permettront de suivre la lumière tout le long de son chemin au travers du microscope. 

  1. Ouvrez le fichier du trajet lumineux

  2. En partant de la source lumineuse et en se dirigeant vers le détecteur, vérifiez qu'il y a effectivement de la lumière après chaque composant du microscope

FAQ

Puis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture?

Non. C'est un microscope droit conçu pour l'observation de spécimen entre lame et lamelles (d'épaisseur 0.17mm).

Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.


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