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Microscope inversé Nikon TE2000-E

Pavillon Bombardier, Local 3132
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 1

Instrument octroyé au Dr. Steve Michnick par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)

  • Microscope à champ large
    • Lumière transmise
      • Contraste de phase
      • Contraste interférentiel différentiel (DIC)
    • Fluorescence
  • Platine motorisée

Utilisations principales:

  • Imagerie à haute résolution
  • Imagerie en plaques de culture
  • Imagerie en temps réel
  • Imagerie en time-lapse

Sources lumineuses

  • Lampe halogène pour la lumière transmise

  • X-Cite exacte pour la fluorescence

Spectre d'émission (manufacturier):

Mesures de puissance aux objectifs du microscope (plateforme CIB):

Emission (nm)

Puissance nominale (mW)

Objectifs

  1. 4x/0.1 Air
  2. 10x/0.30 Ph1 Air
  3. 20x/0.45 Ph1 Air
  4. 40x/0.95 Air
  5. 60x/1.4 Ph3 Huile
  6. 100x/1.45 Huile
PositionNomMarqueNom completIdentifiantGrossissementOuverture numériqueImmersionDistance de travail (mm)Transmittance
(% [nm])		ApplicationsÉpaisseur lamelle (mm)
14x/0.10 AirNikon4x/0.1 Plan

MRL00042

4x0.1Air30>80% [400-900]BF, Fluo-
210x/0.30 Ph1 AurNikon10x/0.30 Plan Fluor Ph1 DL

MRH20101
MRH20105

10x0.3Air15.2>80% [440-700]BF, PhC, Fluo1.2 !
320x/0.45 Ph1 AirNikon20x/0.45 Plan Fluor ELWD Ph1 ADL

MRH48230
MRH48220

20x0.45Air7.4>80% [350-870]BF, PhC, Fluo0-2
440x/0.95 AirNikon40x/0.95 Plan Apo DIC M/N2

MRD00400
MRD70470

40x0.95Air0.14>80% [440-760]BF, Fluo0.11-0.23
560x/1.4 Ph3 HuileNikon60x/1.4 Plan Apo
Ph3 DM

MRD31600

60x1.4Huile0.21 BF, PhC, Fluo0.17
6100x/1.45 HuileNikon100x/1.45 Plan Apo Lambda  OFN25 DIC N2

MRD01905
MRD71970

100x1.45Huile0.13>80% [460-720]BF, Fluo0.17
-40x/0.60 Ph2 AirNikonPlan Fluor 40x/0.60 Ph2 DIC M ELWD 0-2

MRH48430

40x0.6Air2.7-3.7>80% [350-850]BF, PhC, Fluo0-2
-40x/0.60 AirNikonS Plan Fluor 40x/0.6 ELWD DIC N1

MRH08430

40x0.6Air2.8-3.6>80% [350-850]BF, Fluo0-2
-40x/0.90 AirNikonS Fluor 40x/0.90 DIC M/N2

NA

40x

0.9

Air0.3NA
BF, Fluo0.11-0.23
-60x/0.70 AirNikonPlan Fluor 60x/0.70 ELWD DIC M/N1

MRH08630

40x

0.7


Air1.5-2.1>80% [380-880]BF, Fluo0.5-1.5
-60xA/1.40 HuileNikonPlan Apo 60xA/1.40 Oil DIC H

MRD71670

60x1.4Huile0.21>80% [480-700]BF, Fluo0.17
-60x/1.40 HuileNikonPlan Apo VC 60x/1.40 Oil DIC N2

MRD71670

60x1.4Huile0.13>80% [480-700]BF, Fluo0.17
-100x/0.85 AirNikonL Plan 100x/0.85 ODN 25

MUE35900

100x0.85Air0.85 
0-0.7
-100x/1.40 HuileNikonPlan Apo 100x/1.4 Oil DIC H

MRD71970

100x1.4Huile0.13>80% [480-720]BF, Fluo0.17

BF : Champ clair
PhC : Contraste de phase
DIC : Contraste interférentiel différentiel
Fluo : Fluorescence

Filtres

  1. Dichroïque DAPI\FITC\TRITC

  2. DichroïqueCFP\YFP\Cy5

  3. DichroïqueCFP\YFP\mCherry

  4. DAPI
  5. Cy3n
  6. Cy5.5

Aussi disponible

  • CFP

  • FITC

  • YFP

  • Cy3.5

  • mCherry

  • Cy5

Cubes de filtres

PositionNomMarqueIdentifiantExcitationDichroïqueEmissionCommentaires
1Dichroic
DAPI\FITC\TRITC		Chroma86013 v2
86013bs
À utiliser en combinaison avec des filtres d’excitation et d’émission
2

Dichroic
CFP\YFP\Cy5

Chroma86008 v2


86008bs


À utiliser en combinaison avec des filtres d’excitation et d’émission
3

Dichroic
CFP\YFP\mCherry

Chroma

89006 ET


69008bs
À utiliser en combinaison avec des filtres d’excitation et d’émission
4DAPIChroma

31000 v2

AT350/50x

400dclp

D460/50m


5Cy3nChroma

SP102 v1

HQ546/11xQ557lp

HQ567/15m


6Cy5.5Chroma

41022

HQ665/45x

Q695lpHQ725/50m
-eCFPChroma

49001 ET

ET436/20x

T455lp

ET480/40m


-cGFPChroma

31044 v2

D436/20x

455dclp

D480/40m


-FITCChroma

41001

HQ480/40x

Q505lp

HQ535/50m


-YFPChroma

49003 ET

ET500/20x

T515lp

ET535/30m


-Cy3.5Chroma

SP103 v1

HQ581/10x

Q593lp

HQ617/40m


-mCherryChroma

49008 ET

ET560/40x

T585lpxr

ET630/75m


-Cy5Chroma

49006 ET

ET620/60x

T660lpxr

ET700/75m


Filtres d'excitation

PositionNomMarqueIdentifiantExcitationDichroïqueEmission
1DAPIChroma86013 v2 Exc 1AT350/50x

86013bs

 		S457/17m
2

CFP

Chroma86008 v2 Exc 1

S430/25x

86008bs
69008bs

S465/30m
3FITCChroma86013 v2 Exc 2

S484/15x

86013bs

S517/30m

4

YFP

Chroma86008 v2 Exc 2

S510/20x

86008bs
69008bs

S550/50m

5TRITCChroma86013 v2 Exc 3S555/25x

86013bs

S605/40m

6

mCherry

Chroma89006 ET Exc 3

ET572/35x

69008bs

ET632/60m

7

Cy5

Chroma86008 v2 Exc 3

S622/36x

86008bs

S700/75m
8

Empty






Filtres d'emission

PositionNomMarqueIdentifiantExcitationDichroïqueEmission
1DAPIChroma86013 v2 Em 1AT350/50x

86013bs

 		S457/17m
2

CFP

Chroma86008 v2 Em 1

S430/25x

86008bs
69008bs

S465/30m
3FITCChroma86013 v2 Em 2

S484/15x

86013bs

S517/30m

4

YFP

SemrockFF01-550/49-26

S510/20x

86008bs
69008bs

F01-550/49-25

5TRITCChroma86013 v2 Em 3S555/25x

86013bs

S605/40m

6

mCherry

SemrockFF01-641/75-25

ET572/35x

69008bs

FF01-641/75-25

7

Cy5

Chroma86008 v2 Em 3

S622/36x

86008bs

S700/75m
8

Empty






9

Shutter






10

Shutter






Détecteur

  • Hamamatsu ORCA Flash v2 CMOS

    • Camera monochrome

    • 2048 x 2048 pixels

    • Pixel 6.5 um x 6.5 um

    • 30 images/s à pleine résolution (100 images/s avec connecteur Camera Link)

    • Plage dynamique : 1:18000 en 16 bits

    • Réponse spectrale : >40 % entre 400 et 850 nm, maximum de 80 % à 550 nm

  1. Si ce n’est pas déjà fait, allumez l’ordinateur (#1) et connectez-vous à Windows avec vos identifiants UdeM

  2. Retirez la housse du microscope

  3. Allumez la source lumineuse X-Cite exacte (#2)

  4. Allumez la barre d’alimentation du microscope (#3)

  5. Si vous utilisez le logiciel pour la première fois, vous devez importer les paramètres spécifiques du microscope avant de lancer le logiciel d’acquisition. Veuillez consulter la section Première utilisation ci-dessous pour les instructions détaillées

  6. Lancez NIS-Elements

Lors de la première utilisation du logiciel d’acquisition, il est nécessaire d’importer les paramètres spécifiques du microscope dans le logiciel. Cette procédure est généralement réalisée lors de la séance de formation. Cependant, elle peut également être utilisée pour réinitialiser le logiciel s’il ne s’affiche pas correctement, par exemple.

Veuillez noter que cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et restaurera le logiciel à ses paramètres d’origine.

  1. Si NIS-Elements est ouvert, fermez-le et attendez qu’il soit complètement fermé

  2. Sur le Bureau, ouvrez le dossier Softwares

  3. Ouvrez NIS Settings Utility

  4. Cliquez sur l’onglet Import

  5. Cliquez sur Parcourir

  6. Naviguez jusqu’à votre dossier Documents

  7. Sélectionnez le fichier NIS Settings for Nikon TE2000E.bin

  8. Cliquez sur Sélectionner

  9. Sélectionnez tous les éléments

  10. Cliquez sur Import

  11. Cliquez sur OK

  12. Fermez NIS Settings Utility

  13. Vous pouvez ensuite ouvrir NIS-Elements

Cette procédure place le microscope dans une configuration sécuritaire pour charger votre échantillon. À la fin, le microscope sera prêt pour l’acquisition.

  1. Si ce n’est pas déjà fait, dans NIS-Elements cliquez sur 4x pour sélectionnez l’objectif 4x
    L’objectif 4x est le plus sécuritaire, car il possède la plus grande distance de travail (30 mm). L’échantillon apparaîtra parfaitement net bien avant que la lentille ne s’en approche. Il est recommandé de toujours faire la mise au point d’abord avec l’objectif le plus sécuritaire. Les objectifs sont parfocaux, ce qui signifie qu’une fois la mise au point faite avec l’objectif le plus sécuritaire, vous pourrez facilement retrouver votre échantillon avec un autre objectif. L’objectif 10x est également sécuritaire, avec une distance de travail de 15,2 mm.
  2. Si ce n’est pas déjà fait, appuyez sur la touche Escape pour abaisser l’objectif à sa position la plus basse
  3. Placez la lame de test sur la platine du microscope, avec la lamelle orientée vers l’objectif

    Important

    Utilisez toujours la lame de test pour effectuer la première mise au point

  4. Si nécessaire, déplacez la platine pour centrer l’échantillon sur l’objectif
  5. Dans NIS-Elements, sélectionnez la configuration optique BF vis ou la fluorescence souhaitée (DAPI vis, …) pour activer la configuration
  6. Ajustez la mise au point à l’aide de la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu’à ce que l’image soit parfaitement nette

    La mise au point peut être trouvée à Z = mm.
    La valeur Z peut être consultée dans l’onglet Position XYZ du logiciel NIS-Elements.


  7. Dans NIS-Elements, sélectionnez la configuration optique Off pour éteindre l’illumination


Important

Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.
  1. Dans NIS-Elements, cliquez sur 10x, 20x ou 40x pour sélectionner l’objectif souhaité

    L’objectif 40x est le meilleur objectif à air car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) ainsi que la plus grande ouverture numérique (0,95).


  2. Dans NIS-Elements, sélectionnez la configuration optique BF vis ou la fluorescence souhaitée (DAPI vis, …) pour activer la configuration
  3. Ajustez la mise au point à l’aide de la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu’à ce que l’image soit parfaitement nette
  4. Sélectionnez la configuration optique Off pour éteindre l’illumination.
  5. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

Après avoir effectué la première mise au point, dans NIS-Elements :

  1. Cliquez sur Escape pour abaisser les objectifs

  2. Cliquez sur 60x Oil ou 100x Oil pour sélectionner l’objectif désiré

    L’objectif 100x est le meilleur car il possède la plus grande ouverture numérique 1.45.

  3. Déposez une seule goutte d’huile sur l’objectif

  4. Dans NIS-Elements, appuyez à nouveau sur Escape pour remonter l’objectif à sa position initiale

  5. Sélectionnez la configuration optique BF vis ou la fluorescence souhaitée (DAPI vis, …) pour activer la configuration

  6. Ajustez la mise au point à l’aide de la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu’à ce que l’image soit parfaitement nette

  7. Sélectionnez la configuration optique Off pour éteindre l’illumination

  8. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

  • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
  • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
  • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

Important

Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

  1. Sauvegardez vos données

  2. Si un objectif à immersion huile a été utilisé, nettoyez-le avec un nettoyant pour lentilles et du papier pour lentilles (pas de Kimwipes)

  3. Sélectionnez l’objectif de plus faible grossissement et appuyez sur Escape pour placer les objectifs en position sécurisée

  4. Fermez NIS-Elements

  5. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque externe, puis supprimez-les du disque local C:

  6. Éteignez l’ordinateur

  7. Éteignez la source lumineuse X-Cite exacte (#2)

  8. Éteignez la barre d’alimentation du microscope (#3)

  9. Recouvrez le microscope avec la housse de protection

Rappels importants

  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre

Dépannage

Cela peut arriver lorsque le logiciel d’acquisition est lancé avant que la caméra ne soit complètement initialisée.

  • Éteignez NIS-Elements
  • Éteignez la caméra
  • Attendez quelques secondes
  • Rallumez la caméra
  • Attendez que la caméra soit complètement initialisée (le voyant à l’arrière de la caméra cesse de clignoter)
  • Lancez NIS-Elements

FAQ

Oui. Il s’agit d’un microscope inversé conçu pour observer des spécimens dans une boîte de culture ou une plaque multi-puits. Les objectifs sont optimisés pour l’imagerie à travers des plaques multi-puits à fond en verre fin. Vous pouvez également imager des spécimens montés entre une lame et une lamelle de 0.17 mm d’épaisseur. Pour les acquisitions en time-lapse longue durée, faites attention à la phototoxicité.

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