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Microscope super-résolution Zeiss Elyra PS.1

Pavillon J-A Bombardier, Local 3223-3
Tarif d'utilisation Microscope Avancé tier 2

Instrument octroyé aux Dr Daniel Zenklusen et Pascal Chartrand par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)

  • Applications
    • Lumière transmise
    • Fluorescence
    • Imagerie du vivant
    • magerie super résolution

  • Sources lumineuses

    • Lampe LED pour la lumière transmise

    • X-Cite Xylis  pour la fluorescence visible
    • Lasers (405/488/561/631) pour la fluorescence
      Laser (nm)Puissance nominale (mW)Puissance à l'objectif 10x
      40550
      488100
      561100
      642150
  • Objectifs
  1. 10x/0.3 Air WD
  2. 63x/1.4 Huile 1.4 WD
  3. Vide
  4. Vide
  5. Vide
  6. Vide
    PositionNomMarqueNom completIdentifiantGrossissementOuverture numériqueImmersionTypeDistance de travail (mm)Transmittance
    (% [nm])    		TechniqueÉpaisseur du couvre-objet (mm)
    110x/0.3 AirZeiss10x/0.3 Plan Neo-Fluoar
    		10x0.3AirPlan NeoFLuar


    		0.17
    263x/1.4Zeiss63x/1.4 Plan Apochromat
    		63x1.4HuilePlan ApoChromat



    BF : Champ clair (Bright-field)
    PhC : Contraste de phase


  • Cubes de filtres
    1. DAPI
      PositionNomMarqueIdentifiantFiltre d'excitation Miroir dichroïqueFiltre d'émissionCommentaires
      1DAPI
      Filter Set 49      		Zeiss

      488049-9901

      		365/50
      [325-375]      		395LP445/50
      [420-470]
  • Détecteur
    • 2 Caméras Andor 512 x 512 pixels, -bit, images/s à pleine résolution, taille du capteur mm x mm, taille de pixel 16um x 16um


Démarrage
  1. Allumez l’ordinateur (#1)
  2. Allumez la multiprise d’alimentation du microscope (#2), à droite de l'écran

  3. Utilisez vos identifiants UdM pour vous connecter à Windows

    Lors de la première utilisation il est nécessaire d’importer les paramètres du microscope AVANT de démarrer le logiciel. Pour ce faire, suivre les instructions Première Utilisation.

  4. Démarrez le logiciel Zen Black

Première Utilisation

Lors de la première utilisation, il est nécessaire d’importer dans le logiciel les paramètres spécifiques au microscope. Cette procédure est habituellement réalisée lors de la séance de formation.
Il est cependant également possible de l’utiliser pour réinitialiser le logiciel si celui-ci ne s‘affiche pas correctement par exemple. 

Attention, cette procédure supprimera tous vos protocoles d’expérience et rétablira les paramètres originaux du logiciel.

  1. Si ouvert, fermez le logiciel Zen Black et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
  2. Sur le Bureau ouvrez le dossier Documentation
  3. Double-cliquez sur Settings for Elyra
  4. Cliquez sur Yes
  5. Cliquez sur OK
  6. Un script s'excutera et une fenêtre noire apparaitra brièvement
  7. Vous pouvez ensuite réouvrir le logiciel Zen Black
Chargement des échantillons

Cette procédure permet de mettre le microscope dans une configuration sécuritaire et d'effectuer une calibration de la mise au point. À la fin de cette procédure le microscope sera prêt pour l'acquisition.

Calibration de la mise au point (Z)

Sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
  2. Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
  3. Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile
  4. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives>10x pour sélectionner l'objectif 10x
  5. Si demandé, appuyez sur Done pour supprimer l'avertissement de nettoyage de l'objectif à huile
  6. Appuyez sur Home>Microscope>XYZ>Position>Z-Position>Set zero>Auto pour effectuer la calibration de la mise au point
  7. Appuyez sur OK pour lancer la procédure de calibration de la mise au point
  8. Attendre quelques secondes que la calibration soit terminée

Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z=1.7 mm pour l’encart ajustable et Z=2.4 mm pour les encarts simples. La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position

Première mise au point

Faire d’abord la calibration en Z avant d'effectuer la première mise au point.

Sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur 10x pour sélectionner l'objectif 10x

    L’objectif 10x est le plus sécuritaire car il possède une grande distance de travail (6.5 mm). L'échantillon apparaitra parfaitement net bien avant que l'objectif ne s'approche de celui-ci. Il est recommandé de toujours faire la première mise au point avec un objectif sécuritaire. Les objectifs sont para-focaux, faire la mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire vous permettra ensuite de trouver facilement votre échantillon avec un autre objectif.

  3. Appuyez sur Home>Load Position pour faire descendre la platine dans sa position la plus basse
  4. Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
  5. Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message « Lower Z limit reached» qui s'affiche sur l'écran tactile

  6. Selectionnez un des 3 encarts disponibles: i) Petri, ii) Lame ou iii) Combo avec ajustement de l’inclinaison

  7. Placez la lame de test dans l'encart avec le couvre-objet vers l'objectif

    Toujours utiliser la lame de test pour effectuer la première mise au point.


  8. Éteindre le controleur du Piezo

    Toujours éteindre le Piezo avant de toucher à l'échantillon.

     

  9. Placer l’encart sur la platine du microscope 

Sur l’ordinateur :

  1. Ouvrez le logiciel Zen Black

  2. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF visible ou la Fluo visible pour activer la configuration

  3. Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette

    Si calibrée, la mise au point est aux alentours de Z=1.7 mm pour l’encart ajustable et Z=2.4 mm pour les encarts simples. La valeur de la position en Z est visible sur l'écran tactile Home>Z-Position

  4. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Mise au point secondaire

Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif et de poursuivre avec la mise au point secondaire.

Mise au point avec les objectifs à air

Ce microscope ne possède pas d'autres objectifs à air que le 10x. Cependant s'il en avait la procédure serait la suivante::

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Turret>Objectives

  2. Appuyez sur l'objectif désiré

Dans le logiciel Zen Black :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF visible ou la Fluo visible pour activer la configuration
  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
  4. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Mise au point avec les objectifs à l'huile

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Control>Objectives

  2. Appuyez sur l'objectif 63x. Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.

    L’objectif 63x est le meilleur objectif à huile car il possède le plus grand nombre de corrections optiques (Plan Apochromat) et la plus grande ouverture numérique (1.4). Il offre une résolution latérale de 420nm à une longueur d'onde de 550nm.

     

  3. Retirez votre échantillon
  4. Déposer une goutte d’huile sur l'objectif
  5. Replacez votre échantillon
  6. Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.
  7. Allumez le controlleur du Piezo

    Toujours éteindre le Piezo avant de toucher à l'échantillon.


Dans le logiciel Zen Black :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF visible ou la Fluo visible pour activer la configuration
  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
  4. Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Gestion du stockage
  • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
  • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
  • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

Fermeture
  1. Enregistrez vos données
  2. Fermez le logiciel Zen Black
  3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
  4. Nettoyez les objectifs à huile avec du nettoyant et du papier à lentille
  5. Éteindre la barre d’alimentation du microscope (#2)
  6. Éteindre l'ordinateur (#1)

Rappels Importants

  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre
Les schémas suivants permettent de suivre le trajet lumineux en lumière transmise (fond clair, contraste de phase) et en lumière réfléchie (fluorescence).
Section disponible dans la version anglaise.

Section disponible dans la version anglaise.

Dépannage

Je ne vois pas de fluorescence

Ce microscope est entièrement motorisé à l'exception de la lampe Xylis pour la fluorescence visible. Assurez vous que la lampe soit allumée en appuyant sur le bouton de la telecomande.

FAQ

Puis-je utiliser ce microscope pour observer des cellules en culture?

Oui. C'est un microscope inversé conçu pour l'observation de spécimen vivant.

Plus de dépannage et de FAQs sont disponibles dans la version anglaise.


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