- Created by Nicolas Stifani, last updated on Sept 24, 2025 10 minute read
Microscope Zeiss Axio-Observer Z1 Colibri
Pavillon Desmarais, Local 2234
Tarif d'utilisation Microscope Simple
Instrument octroyé aux Dre Audrey Claing et Dr Jean-Philippe Gratton par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)
- Plein champ
- Lumière transmise
- Champs clair
- Contraste de phase
- Fluorescence
- Lumière transmise
- Incubation
- Imagerie longue durée
- Déconvolution
- Extended Depth Focus (voir FAQ)
Zeiss Z1 Colibri
Sources lumineuses
Lampe LED pour la lumière transmise
Zeiss Colibri 7 R[G/Y]B-UV (385/469/555-590/631 pour la fluorescence
Pic d'émission (nm) | Puissance nominale (mW) | Puissance mesurée (mW) |
---|---|---|
385/30 | 150 | |
469/38 | 110 | |
555/30 | 31 | |
631/33 | 50 |
Objectifs
2.5x/0.075 Air
- 10x/0.25 Air Ph1
- 20x/0.5 Air Ph2
40x/0.75 Air Ph2
- 63x/0.75 Air Ph2 Long Distance
- 63x/1.4 Huile
Position | Nom | Marque | Nom complet | ID | Grossissement | Ouverture numérique | Immersion | Type | Distance de travail (mm) | Transmittance (% [nm]) | Technique | Épaisseur du couvre-objet (mm) |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
1 | 2.5x/0.075 Air | Zeiss | 2.5x/0.075 EC Plan-Neofluar | 420320-9901-000 | 2.5x | 0.075 | Air | Plan Neofluar | 9.5 | >80% [400-840] | BF, Fluo | 0.17 |
2 | 10x/0.25 Air | Zeiss | 10x/0.25 Ph1 N-Achroplan | 420941-9911-000 | 10x | 0.25 | Air | N-AchroPlan | 6.5 | Not available | BF, PhC, Fluo | 0.17 |
3 | 20x/0.5 Air | Zeiss | 20x/0.50 Ph2 EC Plan-Neofluar | 420351-9910-000 | 20x | 0.50 | Air | Plan Neofluar | 2.0 | Not Available | BF, PhC, Fluo | 0.17 |
4 | 40x/0.75 | Zeiss | 40x/0.75 Ph2 EC Plan-Neofluar | 40x | 0.75 | Air | Plan Neofluar | 0.71 | Not Available | BF, PhC, Fluo | 0.17 | |
5 | 63x/0.75 Air | Zeiss | 63x/0.75 Corr Ph2 | 421381-9970-000 | 63x | 0.75 | Air | LD Plan-Neofluar | 1.7 at cover glass 0.75 | Not Available | BF, PhC, Fluo | 0 - 1.5 |
6 | 63x/1.4 Huile | Zeiss | 63x/1.4 DIC Plan-Apochromat Oil | 420782-9900-000 | 63x | 1.4 | Huile | Plan Apochromat | 0.19 | >80% [400-700] | BF, Fluo | 0.17 |
BF : Champ clair (Brightfield)
PhC : Contraste de phase
Cubes de filtres
- DAPI
- GFP
- Rhodamine
- DHE (dihydroethidium)
- Cy5
- Quadruple DAPI/GFP/Cy3/Cy5
Position | Nom | Marque | ID | Filtre d'excitation | Miroir dichroïque | Filtre d'émission | Commentaires |
---|---|---|---|---|---|---|---|
1 | DAPI Filter Set 49 | Zeiss | 365/50 [325-375] | 395LP | 445/50 [420-470] | ||
2 | GFP Filter Set 13 | Zeiss | 488013-0000 | 470/20 | 495LP | 517/25 [505-530] | |
3 | Rhodamine Filter Set 43 | Zeiss | 545/25 [533-567] | 570LP | 605/70 [570-640] | ||
4 | DHE | Custom | Custom | 500/50 | 540LP | 580/20 [570-590] | Caractéristiques indéterminées Valeurs supposées |
5 | Cy5 Filter Set 50 | Zeiss | 488050-9901 | 640/30 [625-655] | 660LP | 690/50 | |
6 | Quadruple DAPI/GFP/Cy3/Cy5 Filter Set 90 | Zeiss | QBS 405 + 493 + 575 + 653 | QBP 425/30+514/30+592/25+709/100 | Filtres d'excitation inclus dans la source lumineuse |
Détecteur
- Zeiss AxioCam MRm
Camera | Zeiss AxioCam MRm |
---|---|
Sensor Type | CCD |
Sensor Category | Monochrome |
Nb Pixels | 1.4 M |
Pixel Layout | 1388 x 1040 |
Pixel size | 6.45 um |
Sensor size | 8.9 mm x 6.7 mm |
Sensor diameter | 11 mm |
Bit depth | 12-bit |
Speed at full resolution | 13 images/s |
Max QE | 55 % |
Readout noise | 8 e⁻ |
Cooling | Pelletier |
Dark Current | 0.7 e⁻/pixel/sec |
Full well capacity | 17 000 e- |
Dynamic Range | 1:2000 |
Interface | FireWire (IEEE 1394a) |
Mount | C-mount |
- PCO Edge 5.5
Camera | PCO Edge 5.5 |
---|---|
Sensor Type | sCMOS |
Sensor Category | Monochrome |
Nb Pixels | 5.5 M |
Pixel Layout | 2560 x 2160 |
Pixel size | 6.5 um |
Sensor size | 16.6 mm x 14.0 mm |
Sensor diameter | 21.8 mm |
Bit depth | 16-bit |
Speed at full resolution | 100 images/s |
Max QE | 60 % at 600 nm |
Reading noise | 1.0 e⁻ |
Cooling | Forced air +7C |
Dark Current | 0.6 e⁻/pixel/sec |
Full well capacity | 30 000 e- |
Dynamic Range | 1:30000 |
Interface | Dual Camera Link PCIe |
Mount | C-mount |
- Si ce n'est pas déjà fait, allumez l'ordinateur (#1) et connectez-vous à Windows en utilisant vos identifiants UdeM
- Retirez la housse de protection du microscope
- Si l'incubation est nécessaire, allumez la barre d'alimentation d'incubation (#2) sur le bureau près de l'ordinateur et ouvrez la bouteille de CO₂ (#2B) près de l'évier
Assurez-vous que l’humidificateur est correctement rempli d’eau distillée.
- Allumez la barre d'alimentation du microscope (#3) sur le bureau près de l'ordinateur
- Lors de la première utilisation de l'instrument , il est nécessaire d'importer la configuration du microscope avant de démarrer le logiciel. Voir la section « Première utilisation » ci-dessous.
- Démarrer Zen
Lorsque vous utilisez l’instrument pour la première fois, il est nécessaire d’importer la configuration du microscope dans le logiciel Zen. Cette procédure est généralement effectuée lors de la séance de formation. Toutefois, elle peut également être utilisée pour réinitialiser le logiciel en cas d'affichage incorrect ou de dysfonctionnement.
Attention : lancer cette procédure effacera tous vos protocoles d'expérience et réinitialisera le logiciel à ses paramètres d'usine. Demandez de l'aide si vous n’êtes pas certain de vouloir continuer.
- Si ouvert, fermez le logiciel Zen et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
- Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares
- Double-cliquez sur Zen Settings for Axio-Observer Z1-Colibri
- Un script s'exécutera et une fenêtre noire apparaîtra brièvement
- Cliquez sur OK pour fermer le message Settings for Zen have been imported successfully.
- Vous pouvez ensuite ouvrir le logiciel Zen
Pendant cette procédure, vous allez :
- Configurer le microscope dans une configuration sécurisée
- Effectuer une calibration
- Charger votre échantillon
- Trouver et ajuster la mise au point
Une fois terminé, votre échantillon sera prêt pour l’acquisition.
Cette étape est nécessaire pour calibrer le microscope en XY et Z. Effectuer cette calibration réduira considérablement le temps nécessaire pour localiser et faire la mise au point sur votre échantillon.
- Si cela n’a pas encore été fait, sélectionnez l’objectif de plus faible grossissement. Sur l’écran tactile du microscope : Accueil > Microscope > Contrôle > Objectifs > 2,5x.
- Dans Zen, une fois démarré, une fenêtre de calibration devrait apparaître. Cliquez simplement sur Calibrate Now.
Le microscope descendra les objectifs, effectuera d’abord une calibration XY, puis une calibration Z, avant de revenir à sa position initiale.
Une fois calibré, la mise au point se trouve généralement à Z = 1.1 mm pour une lame de microscope.
La position Z peut être consultée sur l’écran tactile du microscope sous Home > Z-Position, ainsi que dans Zen, dans l’onglet Focus situé sur le côté droit de l’écran.
Important
- Si cela n’a pas encore été fait, sélectionnez l’objectif de plus faible grossissement : Home> Microscope > Control > Objectives > 2.5x
- Abaissez l’objectif en appuyant sur Home>Load Position
- Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
- Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message Lower Z limit reached qui s'affiche sur l'écran tactile
- Placez la lame test sur la platine du microscope, avec la lamelle côté objectif
Important
L’utilisation d’une lame test réduira considérablement le temps nécessaire pour configurer l’instrument.
- Si nécessaire, déplacez la platine pour que l'échantillon soit centré sur l'objectif
Dans Zen :
Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (Fluo, DAPI, GFP, Cy3, Cy5) pour activer la configuration
- Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
Une fois calibré, la mise au point se trouve généralement à Z = 1.1 mm pour une lame de microscope.
La position Z peut être consultée sur l’écran tactile du microscope sous Home > Z-Position, ainsi que dans Zen, dans l’onglet Focus situé sur le côté droit de l’écran.
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Important
Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif de plus fort grossissement
Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :
Appuyez sur Home>Microscope>Control>Objectives
- Appuyez sur 10x, 20x, 40x or 63x (0.75) pour sélectionner l'objectif désiré
L’objectif 40x est le meilleur objectif à Air car il possède la plus grande ouverture numérique (0.75) avec un grand champ de vision (40x).
Dans Zen :
Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (Fluo, DAPI, GFP, Cy3, Cy5) pour activer la configuration
- Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :
Appuyez sur Home>Microscope>Control>Objectives
Appuyez sur l'objectif désiré 63x Oil (1.4). Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.
Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon
- Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.
Dans le logiciel Zen :
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (Fluo, DAPI, GFP, Cy3, Cy5)) pour activer la configuration
- Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
- Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination
Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !
- Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
- À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
- Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).
Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:
- Enregistrez vos données
- Fermez le logiciel Zen
- Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
- Si vous avez utilisé des objectifs à immersion, nettoyez-les avec du nettoyant pour lentilles et du papier
- Sélectionnez l'objectif 2.5x et remettez les objectifs en position basse (Load position)
- Si utilisé, éteignez la multiprise d’alimentation du module d'incubation (#2A) et fermez la bonbonne de CO2 (#2B)
- Éteignez la barre d’alimentation du microscope (#3)
- Éteignez l'ordinateur
- Couvrir l’instrument avec la housse de protection
Rappels
- Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
- Laissez le microscope et l’espace de travail propre
Dépannage
Le soutien technique est gratuit et illimité. Contactez-nous !
Cela se produit dans les conditions suivantes :
À 2,5× en utilisant le canal DAPI ou GFP
À 10× en utilisant le canal GFP
À 20× en utilisant le canal GFP
Pour résoudre ce problème, vous pouvez utiliser l’une des options suivantes :
Incliner le bras de la lumière transmise vers l’arrière
Fermer l’obturateur manuel entre le condenseur et la lumière transmise
Utiliser un objectif de plus fort grossissement
FAQ
Oui. C'est un microscope inversé conçu pour l'observation de spécimen en cultures. Les objectifs sont optimisés pour observer au travers de plaques multi-puits à fond de verre. Il est également possible d'observer des échantillons entre lame et lamelles (d'épaisseur 0.17mm). Pour des longues acquisitions attention à la photo-toxicity.
Oui, mais… Ce microscope est équipé d’un module d’incubation pour maintenir la température, l’humidité et le gaz. Cependant, il ne dispose pas d’un système Definite Focus capable de maintenir la mise au point automatiquement sur de longues durées. Il est donc possible de perdre la mise au point lors d’acquisitions prolongées. Vous pouvez toujours effectuer un autofocus logiciel à différents moments, mais attention à la photo-toxicity, surtout si vous utilisez la fluorescence.
La mise au point étendue (Extended Focus) est une méthode pour aplatir une pile Z en ne conservant que les informations pertinentes.
Dans Zen :
Sélectionnez l’onglet Traitement (Processing)
Choisissez la méthode Profondeur de champ étendue (Extended Depth of Focus)
Cliquez sur Appliquer (Apply)
Attendez la fin du traitement
Enregistrez l’image traitée
Z Stack animation
Maximum Intensity projection of a Z-Stack
Extended Depth of Focus projection of a Z-Stack
Trucs et Astuces
Il est possible d'utiliser une image pour se déplacer, naviguer et sélectionner ses zones d'intérêt. Pour cela:
- Faire une acquisition rapide à faible grossissement (2.5x) de votre échantillon en entier en utilisant le mode Tiles et en définissant la région autour de votre échantillon
- Dans l'image produite en bas à gauche cliquez sur Stage pour activer la navigation dans l'image
- Vous pouvez ensuite directement cliquer sur l'image pour déplacer la platine et centrer l'échantillon à l'endroit désiré. C'est très pratique pour ajouter des positions pour faire ensuite une acquisition à plus fort grossissement.