Microscope Zeiss Axio-Observer Z1 Colibri

Pavillon Desmarais, Local 2234
Tarif d'utilisation Microscope Simple

Instrument octroyé aux Dre Audrey Claing et Dr Jean-Philippe Gratton par la Fondation Canadienne pour l'Innovation (FCI)

  • Plein champ
    • Lumière transmise
    • Champs clair
    • Contraste de phase
    • Fluorescence
  • Incubation
  • Imagerie longue durée
  • Déconvolution
  • Extended Depth Focus (voir FAQ)


Sources lumineuses

  • Lampe LED pour la lumière transmise

  • Zeiss Colibri 7 R[G/Y]B-UV (385/469/555-590/631 pour la fluorescence

Pic d'émission (nm)Puissance nominale (mW)Puissance mesurée (mW)
385/30150 
469/38110 
555/3031 
631/3350 

Zeiss Colibri 7 Product Information

Objectifs

    1. 2.5x/0.075 Air

    2. 10x/0.25 Air Ph1
    3. 20x/0.5 Air Ph2
    4. 40x/0.75 Air Ph2

    5. 63x/0.75 Air Ph2 Long Distance
    6. 63x/1.4 Huile
PositionNomMarqueNom completIDGrossissementOuverture numériqueImmersionTypeDistance de travail (mm)Transmittance
(% [nm])
TechniqueÉpaisseur du couvre-objet (mm)
12.5x/0.075
Air
Zeiss2.5x/0.075
EC Plan-Neofluar
420320-9901-0002.5x0.075AirPlan Neofluar9.5>80% [400-840]BF, Fluo0.17
210x/0.25
Air
Zeiss10x/0.25 Ph1
N-Achroplan
420941-9911-00010x0.25AirN-AchroPlan

6.5

Not availableBF, PhC, Fluo0.17
320x/0.5
Air
Zeiss20x/0.50 Ph2
EC Plan-Neofluar

420351-9910-000

20x0.50AirPlan Neofluar2.0Not AvailableBF, PhC, Fluo0.17
4

40x/0.75
Air

Zeiss40x/0.75 Ph2
EC Plan-Neofluar

420361-9910-000

40x

0.75

Air

Plan Neofluar0.71Not AvailableBF, PhC, Fluo

0.17

563x/0.75
Air
Zeiss

63x/0.75 Corr Ph2
LD Plan-Neofluar

421381-9970-000

63x

0.75

AirLD Plan-Neofluar1.7 at cover glass 0.75 Not AvailableBF, PhC, Fluo

0 - 1.5

663x/1.4
Huile
Zeiss63x/1.4 DIC
 Plan-Apochromat Oil
420782-9900-00063x1.4HuilePlan Apochromat0.19>80% [400-700]BF, Fluo0.17

BF : Champ clair (Brightfield)
PhC : Contraste de phase

Cubes de filtres

  1. DAPI
  2. GFP
  3. Rhodamine
  4. DHE (dihydroethidium)
  5. Cy5
  6. Quadruple DAPI/GFP/Cy3/Cy5
PositionNomMarqueIDFiltre d'excitation Miroir dichroïqueFiltre d'émissionCommentaires
1DAPI
Filter Set 49
Zeiss

488049-9901

365/50
[325-375]
395LP445/50
[420-470]

2GFP
Filter Set 13
Zeiss488013-0000

470/20
[460-480]

495LP

517/25
[505-530]

3Rhodamine
Filter Set 43
Zeiss

000000-1114-101

545/25
[533-567]
570LP605/70
[570-640]

4DHECustom

Custom

500/50
[475-525]

540LP580/20
[570-590]
Caractéristiques indéterminées
Valeurs supposées
5Cy5
Filter Set 50
Zeiss488050-9901640/30
[625-655]
660LP

690/50
[665-715]


6Quadruple
DAPI/GFP/Cy3/Cy5
Filter Set 90
Zeiss

489090-9110-000


QBS 405 + 493 + 575 + 653

QBP 425/30+514/30+592/25+709/100

Filtres d'excitation inclus dans la source lumineuse

Détecteur

  • Zeiss AxioCam MRm
CameraZeiss AxioCam MRm

Sensor Type

CCD

Sensor Category

Monochrome

Nb Pixels

1.4 M

Pixel Layout

1388 x 1040

Pixel size

 6.45 um

Sensor size

8.9 mm x 6.7 mm

Sensor diameter

11 mm

Bit depth

12-bit
Speed at full resolution13 images/s

Max QE

 55 %
Readout noise 8 e⁻

Cooling

Pelletier

Dark Current

0.7 e⁻/pixel/sec

Full well capacity

17 000 e-

Dynamic Range

1:2000

Interface

FireWire (IEEE 1394a)

Mount

C-mount

Zeiss_AxioCam MRm_Datasheet.pdf

  • PCO Edge 5.5
CameraPCO Edge 5.5

Sensor Type

sCMOS

Sensor Category

Monochrome

Nb Pixels

5.5 M

Pixel Layout

2560 x 2160

Pixel size

 6.5 um

Sensor size

16.6 mm x  14.0 mm

Sensor diameter

21.8 mm

Bit depth

16-bit
Speed at full resolution100 images/s

Max QE

 60 % at 600 nm
Reading noise 1.0 e⁻

Cooling

Forced air +7C

Dark Current

0.6 e⁻/pixel/sec

Full well capacity

30 000 e-

Dynamic Range

1:30000

Interface

Dual Camera Link PCIe

Mount

C-mount

PCO_Edge 5.5_Datasheet.pdf
  1. Si ce n'est pas déjà fait, allumez l'ordinateur (#1) et connectez-vous à Windows en utilisant vos identifiants UdeM
  2. Retirez la housse de protection du microscope
  3. Si l'incubation est nécessaire,  allumez la barre d'alimentation d'incubation (#2) sur le bureau près de l'ordinateur et ouvrez la bouteille de CO₂ (#2B) près de l'évier

    Assurez-vous que l’humidificateur est correctement rempli d’eau distillée.


  4. Allumez la barre d'alimentation du microscope (#3) sur le bureau près de l'ordinateur
  5. Lors de la première utilisation de l'instrument , il est nécessaire d'importer la configuration du microscope avant de démarrer le logiciel. Voir la section « Première utilisation » ci-dessous.
  6. Démarrer Zen

Lorsque vous utilisez l’instrument pour la première fois, il est nécessaire d’importer la configuration du microscope dans le logiciel Zen. Cette procédure est généralement effectuée lors de la séance de formation. Toutefois, elle peut également être utilisée pour réinitialiser le logiciel en cas d'affichage incorrect ou de dysfonctionnement.

Attention : lancer cette procédure effacera tous vos protocoles d'expérience et réinitialisera le logiciel à ses paramètres d'usine. Demandez de l'aide si vous n’êtes pas certain de vouloir continuer.

  1. Si ouvert, fermez le logiciel Zen et attendre sa fermeture complète (jusqu’à 30 secondes)
  2. Sur le Bureau ouvrez le dossier Softwares
  3. Double-cliquez sur Zen Settings for Axio-Observer Z1-Colibri
  4. Un script s'exécutera et une fenêtre noire apparaîtra brièvement
  5. Cliquez sur OK pour fermer le message Settings for Zen have been imported successfully.
  6. Vous pouvez ensuite ouvrir le logiciel Zen

Pendant cette procédure, vous allez :

  • Configurer le microscope dans une configuration sécurisée
  • Effectuer une calibration
  • Charger votre échantillon
  • Trouver et ajuster la mise au point

Une fois terminé, votre échantillon sera prêt pour l’acquisition.

Cette étape est nécessaire pour calibrer le microscope en XY et Z. Effectuer cette calibration réduira considérablement le temps nécessaire pour localiser et faire la mise au point sur votre échantillon.

  • Si cela n’a pas encore été fait, sélectionnez l’objectif de plus faible grossissement. Sur l’écran tactile du microscope : Accueil > Microscope > Contrôle > Objectifs > 2,5x.
  • Dans Zen, une fois démarré, une fenêtre de calibration devrait apparaître. Cliquez simplement sur Calibrate Now.
    Le microscope descendra les objectifs, effectuera d’abord une calibration XY, puis une calibration Z, avant de revenir à sa position initiale.

Une fois calibré, la mise au point se trouve généralement à Z = 1.1 mm pour une lame de microscope.
La position Z peut être consultée sur l’écran tactile du microscope sous Home > Z-Position, ainsi que dans Zen, dans l’onglet Focus situé sur le côté droit de l’écran.

Important

Assurez-vous que la calibration a été effectuée au préalable. La calibration réduira considérablement le temps nécessaire pour localiser et faire la mise au point sur votre échantillon.
  1. Si cela n’a pas encore été fait, sélectionnez l’objectif de plus faible grossissement : Home> Microscope > Control > Objectives > 2.5x
The 2.5× and 10× objectives are the safest to use due to their long working distance (>6 mm). The sample will appear in sharp focus well before the objective approaches it. It is recommended to always focus using the safest objectives first. Since the objectives are parafocal, focusing with the safest objectives will facilitate locating the sample when switching to higher-magnification objectives.
  1. Abaissez l’objectif en appuyant sur Home>Load Position
  2. Appuyez sur Set Work Position pour mémoriser cette position
  3. Si nécessaire, déplacez la mise au point légèrement vers le haut pour supprimer le message Lower Z limit reached qui s'affiche sur l'écran tactile
  4. Placez la lame test sur la platine du microscope, avec la lamelle côté objectif

Important

L’utilisation d’une lame test réduira considérablement le temps nécessaire pour configurer l’instrument.

  1. Si nécessaire, déplacez la platine pour que l'échantillon soit centré sur l'objectif

Dans Zen :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée  (Fluo, DAPI, GFP, Cy3, Cy5) pour activer la configuration

  2. Ajustez la mise au point avec la molette principale tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette

Une fois calibré, la mise au point se trouve généralement à Z = 1.1 mm pour une lame de microscope.
La position Z peut être consultée sur l’écran tactile du microscope sous Home > Z-Position, ainsi que dans Zen, dans l’onglet Focus situé sur le côté droit de l’écran.

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination

Important

Faire d’abord la première mise au point avec l'objectif le plus sécuritaire avant de sélectionner un autre objectif de plus fort grossissement

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Control>Objectives

  2. Appuyez sur 10x, 20x40x or 63x (0.75) pour sélectionner l'objectif désiré

L’objectif 40x est le meilleur objectif à Air car il possède la plus grande ouverture numérique (0.75) avec un grand champ de vision (40x).

Dans Zen :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée  (Fluo, DAPI, GFP, Cy3, Cy5) pour activer la configuration

  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination

Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

Après avoir effectué la première mise au point, sur l’écran tactile du microscope :

  1. Appuyez sur Home>Microscope>Control>Objectives

  2. Appuyez sur l'objectif désiré 63x Oil (1.4). Le microscope abaissera automatiquement la platine pour que l'échantillon soit accessible.

  3. Déposer une goutte d’huile sur votre échantillon

  4. Appuyez sur Done. Le microscope replacera automatiquement l'échantillon à sa position originale.

Dans le logiciel Zen :

  1. Dans l’onglet Locate, sélectionnez BF ou la fluorescence désirée (Fluo, DAPI, GFP, Cy3, Cy5)) pour activer la configuration
  2. Ajustez la mise au point avec la molette de précision tout en regardant dans les oculaires jusqu'à ce que l'image soit parfaitement nette
  3. Dans l’onglet Locate, sélectionnez Off pour éteindre l'illumination

Votre échantillon est prêt pour l’acquisition !

  • Les fichiers peuvent être sauvés temporairement (pendant l’acquisition) sur le disque local C: (bureau)
  • À la fin de chaque session, copiez vos données sur votre disque externe et supprimez-les du disque local C:
  • Vous pouvez stocker vos fichiers sur le disque D: (Data Storage). Si vous utilisez ce disque, veuillez créer un dossier par laboratoire en utilisant le nom de famille du chercheur principal. À l’intérieur, créez un dossier par utilisateur (Prénom_Nom).

Dans tous les cas, ne stockez pas vos fichiers sur le disque C:

  1. Enregistrez vos données
  2. Fermez le logiciel Zen
  3. Transférez vos données sur le disque D: (Data Storage) ou sur votre disque dur externe et les supprimer du disque local C:
  4. Si vous avez utilisé des objectifs à immersion, nettoyez-les avec du nettoyant pour lentilles et du papier
  5. Sélectionnez l'objectif 2.5x et remettez les objectifs en position basse (Load position)
  6. Si utilisé, éteignez la multiprise d’alimentation du module d'incubation (#2A) et fermez la bonbonne de CO2 (#2B)
  7. Éteignez la barre d’alimentation du microscope (#3)
  8. Éteignez l'ordinateur
  9. Couvrir l’instrument avec la housse de protection

Rappels

  • Récupérez vos échantillons notamment ceux dans le microscope
  • Laissez le microscope et l’espace de travail propre

Dépannage

Le soutien technique est gratuit et illimité. Contactez-nous !

Cela se produit dans les conditions suivantes :

  • À 2,5× en utilisant le canal DAPI ou GFP

  • À 10× en utilisant le canal GFP

  • À 20× en utilisant le canal GFP

Pour résoudre ce problème, vous pouvez utiliser l’une des options suivantes :

  • Incliner le bras de la lumière transmise vers l’arrière

  • Fermer l’obturateur manuel entre le condenseur et la lumière transmise

  • Utiliser un objectif de plus fort grossissement

FAQ

Oui. C'est un microscope inversé conçu pour l'observation de spécimen en cultures. Les objectifs sont optimisés pour observer au travers de plaques multi-puits à fond de verre. Il est également possible d'observer des échantillons entre lame et lamelles (d'épaisseur 0.17mm). Pour des longues acquisitions attention à la photo-toxicity.

Oui, mais… Ce microscope est équipé d’un module d’incubation pour maintenir la température, l’humidité et le gaz. Cependant, il ne dispose pas d’un système Definite Focus capable de maintenir la mise au point automatiquement sur de longues durées. Il est donc possible de perdre la mise au point lors d’acquisitions prolongées. Vous pouvez toujours effectuer un autofocus logiciel à différents moments, mais attention à la  photo-toxicity, surtout si vous utilisez la fluorescence.

La mise au point étendue (Extended Focus) est une méthode pour aplatir une pile Z en ne conservant que les informations pertinentes.

Dans Zen :

  • Sélectionnez l’onglet Traitement (Processing)

  • Choisissez la méthode Profondeur de champ étendue (Extended Depth of Focus)

  • Cliquez sur Appliquer (Apply)

  • Attendez la fin du traitement

  • Enregistrez l’image traitée


Trucs et Astuces

Il est possible d'utiliser une image pour se déplacer, naviguer et sélectionner ses zones d'intérêt. Pour cela:

  • Faire une acquisition rapide à faible grossissement (2.5x) de votre échantillon en entier en utilisant le mode Tiles et en définissant la région autour de votre échantillon
  • Dans l'image produite en bas à gauche cliquez sur Stage pour activer la navigation dans l'image
  • Vous pouvez ensuite directement cliquer sur l'image pour déplacer la platine et centrer l'échantillon à l'endroit désiré. C'est très pratique pour ajouter des positions pour faire ensuite une acquisition à plus fort grossissement.


Plateformes Scientifiques - CI2B               Biologie structurale    |    Cytométrie    |    Microscopie    |    Histologie   |    Instruments et Services

Contenu publié sous licence CC BY-SA 4.0. Partage autorisé sous la même licence avec attribution: "Contenu original par l'Institut Courtois d'innovation biomédicale, utilisé sous CC BY-SA 4.0"